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高滴度慢病毒包装系统
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 631275 Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 16 Rxns ¥10,183
Clontech 631276 Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G) 96 Rxns ¥24,957
Clontech 631277 Lenti-X Packaging Single Shots (Integrase Deficient) 16 Rxns ¥10,406
Clontech 631278 Lenti-X Packaging Single Shots (Ecotropic) 16 Rxns ¥10,406
无标题文档
 
 
慢病毒包装系统 293T包装细胞 慢病毒滴度测定 慢病毒浓缩 慢病毒纯化 转导增强 整合位点检测
 
 
高滴度慢病毒包装系统
Lenti-X single shots是第四代慢病毒包装系统,它通过非常简便、操作一致的一步法来制备高滴度慢病毒。通常情况下,VSV-G型慢病毒滴度可达到107-108 IFU/ml。Lenti-X single shots由单管形式的Xfect Transfection Reagent和经过配比优化的Lenti-X包装质粒组成,两者预混后经过预分装和冻干处理,所以无需额外的转染试剂。只需要将这种混合物与您选择的慢病毒载体在无菌水中重新配制,然后将其添加到10厘米培养皿培养的293T细胞中,例如Lenti-X 293T Cells(Code No. 632180)即可制备高滴度病毒。
 
我们提供以下三种类型的Lenti-X Packaging Single Shots,这些包装系统针对不同的嗜性和整合特征进行了优化。每管中试剂和载体的量,都是以在10厘米培养皿中制备慢病毒来进行优化的。转染过程完全可以在血清存在的情况下进行,使用不含四环素的FBS,对于使用该技术获得高病毒滴度是很关键的。
· Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G)在三款产品中提供最高的病毒滴度(107-108 IFU/ml)和最广的病毒嗜性
· Lenti-X Packaging Single Shots (Ecotropic)病毒嗜性限于小鼠和大鼠来源细胞
· Lenti-X Packaging Single Shots (Integrase Deficient)制备整合能力显著降低的VSV-G假型慢病毒
 
图1. Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G)操作流程。
 
■ 应用
· 慢病毒可以转导广泛的难转染细胞类型
· 轻松构建稳转细胞系
· 制备VSV-G假型,单嗜型或整合酶缺陷型慢病毒
 
■ 观看视频
了解我们的第四代包装系统如何可以产生如此高的病毒滴度。
 
了解使用Lenti-X single shots如何轻松始终如一地获得高滴度慢病毒。
 
■ 实验例
图2. 高效一致的转染可制备出高滴度病毒。在四个独立实验中,按照Lenti-X single shots操作流程包装含有ZsGreen1基因的慢病毒载体。简而言之,在四个Lenti-X single shots中,每一个都添加7 μg pLVX-ZsGreen1质粒;每管涡旋振荡20秒并在室温下孵育10分钟。然后,将混合物添加至汇合度约为80%的培养Lenti-X 293T cells中。转染后48小时,通过荧光显微镜(Panel A,顶部)和光学显微镜(Panel A,底部)拍摄图像。拍摄图像后,收集培养上清液,感染HT1080细胞并进行滴度测定(Panel B,IFU/ml)。
 
图3. 无论是哪种慢病毒载体骨架,使用Lenti-X packaging single shots都可以制备出高滴度病毒。将CMV ZsGreen1表达框克隆到多个慢病毒载体骨架中,然后按照操作指导使用Lenti-X packaging single shots将这些载体包装成为慢病毒。在四个Lenti-X single shots中,每一个都添加7 μg pLVX-ZsGreen1质粒;每管涡旋振荡20秒并在室温下孵育10分钟。然后,将混合物添加至汇合度约为80%的培养Lenti-X 293T cells中。转染后48小时,通过多种方法测定病毒滴度。为了确定感染性,收集上清液并感染HT1080细胞(流式细胞术)。收集的病毒上清液也通过RT-PCR方法定量病毒基因组拷贝数(qRT-PCR,Lenti-X qRT-PCR Titration Kit),ELISA方法测定p24(p24 ELISA,Lenti-X p24 Rapid Titer Kit),或者通过一种快速检测方法(Lenti-X GoStix)测定滴度。
 
图4. 第四代和第三代慢病毒包装系统比较。我们的Lenti-X Packaging single shots使用的是5个独立组件组成的包装系统(Panel A),这5个组件按照特别比例混合,优化了病毒包装性能。gagpolenv基因的分离有效地降低了RCL产生的概率(Wu et al., 2000)。Tet-Off和Tat反式激活因子驱动病毒必需成分高水平表达,诱导级联表达反应,从而可以制备出高滴度慢病毒。pol基因与vpr 基因的融合可以确保反转录酶/整合酶蛋白质能够转运到重组慢病毒颗粒中。本示意图没有显示所有的载体元件。而第三代慢病毒包装系统(Panel B)不包含分离的gagpol序列,也没有使用反式激活级联机制,所以产生的病毒滴度较低。
 
 
 
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