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镍离子快速纯化柱—Capturem 膜技术
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 635710 Capturem His-Tagged Purification Miniprep Kit 20 Purifications ¥2,424
1,939(3.1-4.30促销价)
Clontech 635713 Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Kit 6 Purifications ¥3,158
2,526(3.1-4.30促销价)
Clontech 635715 Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Columns 25 Columns ¥6,983
Clontech 635719 Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Columns 50 Columns ¥12,569
Clontech 635714 Capturem His-Tagged Purification 96 96 well ¥4,468
3,574(3.1-4.30促销价)
Clontech 635724 Capturem His-Tag Large Volume 4 Purifications ¥5,202
4,162(3.1-4.30促销价)
Clontech 635730 Capturem His-Tagged Purification 24-Well Plate 24 well ¥4,568
3,654(3.1-4.30促销价)
 
■ 产品简介
Capturem His-Tagged Purification Kit是以镍离子为配基,结合Capturem 新型膜技术开发的用于His标签蛋白质快速分离纯化的产品。与传统的固定化金属离子树脂相比,Capturem 系列产品以高性能的尼龙膜为介质并对其进行改造,增加了膜孔表面积,对His标签蛋白质的结合能力≥75 mg/cm3。产品最突出的特点是柱床体积小,可在室温下操作,纯化简单快速,比传统树脂的应用范围更加灵活广泛。有小量(miniprep)、中量(maxiprep)、大量(large volume)以及高通量(24 well和96 well)五种规格可供选择。
 
■ 产品特点
· 室温下操作,可应用于哺乳动物细胞和细菌样品
· 操作简单快速,蛋白质小量纯化5 min即可完成,大量纯化也仅需15-30 min
· 操作时间短,有利于蛋白质样品保持活性
· 柱床体积小、带入污染少,与传统的镍离子树脂相比,产物纯度更高
· 一次性使用纯化柱,避免样品之间交叉污染
· 除了部分产品中提供的xTractor Buffer以外,还兼容其他的裂解buffer,通用性强
· 兼容多种添加剂(如β-ME、EDTA、DTT、甘油、TCEP等),可在变性或非变性条件下进行纯化
 
■ Capturem 膜原理
 
 
■ 产品主要参数
 
*收量多少取决于样品的类型、物种以及抗体同种型(isotype)。
 
 
上图A图红色方框部分为Capturem His-Tagged Purification Large Volume Units(白底的瓶顶装置),B图红色方框部分为滤瓶螺纹接头 (可用于33-45 mm直径的瓶口)。图A为纯化装置直接与直径为33 mm的螺纹滤瓶直接连接。图C为纯化装置通过螺纹接头连接了45 mm的滤瓶。图D为纯化装置与50 ml的tube直接连接。
 
 
上图为使用Capturem His-Tagged Purification Large Volume Unit从细菌裂解液中纯化过表达的6×His-GFPuv的演示示例。图A.将纯化装置与直径为33 mm的螺纹滤瓶直接连接。图B.将含有目的蛋白质的澄清裂解液上样。图C.膜在上样和洗涤操作后结合了目的蛋白质,因此呈现出绿色荧光蛋白(GFP)特征性的黄绿色,在洗脱操作之后恢复为初始的白色。图D.目的蛋白质6×His-GFPuv被洗脱进50 ml的收集tube中。
 
■ 操作流程
 
 
■ 实验例
实验例1
 
Capturem纯化柱对不同浓度的多种类添加试剂有良好的兼容性。上图为使用miniprep kit对不同种类不同浓度添加剂的检测结果,操作按照产品说明书进行。每项实验的样品、平衡液、洗涤液及洗脱液中均有所要检测的添加试剂,样品最终进行两次300 μl的洗脱操作。
 
兼容试剂一览表
 
Reagent Compatibility*
  MOPS 200 mM
  HEPES 200 mM
  Tris 200 mM
  EDTA 10 mM
  Beta-mercaptoethanol 30 mM
  DTT 10 mM
  TCEP 5 mM
  Guanidine-HCl 6 M
  Urea 8 M
  Nonionic detergent (Triton X-100) 2%
  Nonionic detergent (Tween 20) 2%
  Anionic detergent (SDS) 1%
  Arginine 500 mM
  Glycine 100 mM
  Histidine 20 mM
  Sodium chloride 2 M
  Imidazole 40 mM
  Glycerol 10%
 
* 表中数据为本产品经测试能够兼容的试剂的最高浓度。
 
实验例2
 
Capturem纯化柱在变性条件下纯化效果良好。使用miniprep kit按照产品说明书进行操作。根据变性和非变性条件添加适当的buffer,每个纯化柱上样均为800 μl表达6×his-GFPuv的细胞裂解上清液,样品中按需要添加8 M尿素或6 M盐酸胍。
 
实验例3
 
Capturem纯化柱纯化哺乳动物细胞表达的6×His标签蛋白质。图A和B,将编码6×his-tagged MAPK1或 6×his-tagged ADRB2的质粒转染293T细胞进行培养。细胞裂解后取澄清的上清液上样,然后用400 μl wash buffer洗涤,再使用300 μl elution buffer洗脱。将各步骤组分通过4-20%的聚丙烯凝胶电泳检测,并做硝酸纤维素膜印记检测。A左图,丽春红染色显示不同组分中的所有蛋白质。A右图,用MAPK1特异性抗体做免疫印迹实验可检测到对应条带。B左图,丽春红染色显示不同组分中的所有蛋白质。B右图,用ADRB2特异性抗体做免疫印迹实验可检测到产物中富集的ADRB2。C,使用编码DsRed-Express2和6×his-tagged Metridia luciferase的双顺反子质粒转染293T细胞,在10 cm的培养皿中培养。取细胞培养上清液用maxiprep柱纯化,6 ml wash buffer洗涤,1 ml elution buffer洗脱。所有离心操作的参数为2,000×g离心5 min,最后通过Ready-to-Glow 对各组分中的荧光素酶的活性进行分析。
 
■ 各种试剂盒组成
· Capturem His-Tagged Purification Miniprep Kit (635710)
Capturem His-Tagged Purification Miniprep Column 20 个
xTractor Buffer 15 ml × 2
Wash Buffer 10 ml
Elution Buffer 10 ml
 
· Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Kit (635713)
Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column 6 个
Capturem Maxiprep Filters 6 个
xTractor Buffer 200 ml
Wash Buffer 40 ml
Elution Buffer 15 ml
 
· Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Columns(635715)*
Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column 25 个
 
· Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Columns(635719)*
Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Column 50 个
 
· Capturem His-Tagged Purification 96(635714)*
Capturem His-Tagged Purification 96-Well Plate 1 块
 
· Capturem His-Tagged Purification Large Volume(635724)*
Capturem His-Tagged Purification Large Volume Unit 4 个(每个盒子中2个)
Bottle Thread Adaptor 1 个
 
· Capturem His-Tagged Purification 24-Well Plate(635730)*
Capturem His-Tagged Purification 24-Well Plate 1 块
 
*注:Capturem His-Tagged Purification 24-well、96-well、Maxiprep Columns以及Large Volume中不含buffer,请使用以下组分的buffer:
 
 
 
缓冲液 组成
Lysis Buffer   推荐使用xTractor Buffer(Code No. 635625),
  也可使用其他标准的裂解buffer
Wash Buffer   150 mM NaCl,20 mM Na3PO4,pH7.6
Elution Buffer   500 mM NaCl,20 mM Na3PO4,500 mM imidazole, pH7.6
 
参考文献
[1] Stephanie S. Pavlovich, Sean P. Lovett,Galina Koroleva, et al. The Egyptian Rousette Genome Reveals Unexpected Features of Bat Antiviral Immunity[J]. Cell, 2018, 173(5):1098–1100.
[2] Sandra Luz Martínez-Hernández, Daniel Cervantes-García, Martín Munoz-Ortega, et al. An anti-amoebic vaccine: generation of the recombinant antigen LC3 from Entamoeba histolytica linked to mutated exotoxin A (PEDIII) via the Pichia pastoris system[J]. Biotechnology Letters, 2017, 39 (8):1149-1157.
[3] Min Kong, Fengjuan Wang, Liuying Tian, et al. Functional identification of glutamate cysteine ligase and glutathione synthetase in the marine yeast Rhodosporidium diobovatum[J]. Science of Nature, 2018, 105 (1-2):4.
[4] Ariana Kariminejada, Mohammadreza Barzgarb, Bita Bozorgmehra, et al. Novel mutations and a severe neurological phenotype in Sjogren-Larsson syndrome patients from Iran[J]. European Journal of Medical Genetics, 2018, 61 (3):139.
[5] Naho Mugita, Takayuki Nambu, Kazuya Takahashi, et al. Proteases, actinidin, papain and trypsin reduce oral biofilm on the tongue in elderly subjects and in vitro[J]. Archives of Oral Biology, 2017, 82:233-240.
[6] Xiao-Xiao Cheng, Li-Hong Zhao, Steven J.Klosterman, et al. The endochitinase VDECH from Verticillium dahliae inhibits spore germination and activates plant defense responses[J]. Plant Science, 2017, 259:12.
 
 
实验操作视频:
https://www.takarabio.com/learning-centers/protein-research/his-tag-purification/protocols/video-capturem-his-miniprep
 
 
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