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产品选择指南

技术服务信息

机构用户解决方案

杆状病毒表达系统
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 631401 BacPAK6 DNA (Bsu36 I digest) 5 Transfections ¥6,474
Clontech 631721 X-GLUC 100 mg ¥5,189
无标题文档
 
Code No. 产品名称
631401   BacPAK6 DNA (Bsu36 I digest)
631721   X-GLUC
 
产品介绍
    与细菌表达系统相比,在昆虫细胞中产生的重组蛋白质的翻译后加工和折叠更类似于哺乳动物过程,有功能的目的蛋白质的产量通常要大得多。因此,为了生产大量的重组蛋白质,许多研究者已经转向杆状病毒表达系统。
 
BacPAK法
    BacPAK系统采用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)在昆虫细胞中表达目标蛋白质。首先把目的基因插入到穿梭载体中,然后与线性化的BacPAK6病毒DNA共转染至昆虫宿主细胞。这个特殊设计的BacPAK6病毒DNA能够迫使病毒和载体之间发生重组,实现高的重组效率。重组之后挑选并纯化几个噬菌斑,验证重组表型。新分离得到的重组病毒就可以扩增并且感染昆虫细胞产生大量的目的蛋白质。
    如有需要,可以使用产品附带的pBacPAK8-GUS作为共转染步骤的阳性对照。该载体具有大肠杆菌β-葡糖醛酸糖苷酶(GUS),克隆在多角体蛋白质启动子的下游。pBacPAK8-GUS与BacPAK6病毒DNA重组后能够表达β-葡糖苷酸酶,该酶可催化底物X-GLUC显现蓝色。
 
产品特点
    ● 每L培养基表达的蛋白质量最高可达500 mg
    ● 重组效率>90%
    ● 蛋白质折叠正确
    ● 可以有效表达具有生物活性的蛋白质
    ● 真核蛋白质的翻译后修饰
 
产品应用
在昆虫细胞中表达重组蛋白质
 
BacPAK6 Viral DNA 图谱
 
操作流程示意图
In-Fusion Ready BacPAK载体和杆状病毒表达系统。将含有目的基因的PCR片段直接克隆到In-Fusion Ready BacPAK载体以构建N末端或C末端蛋白质的表达载体。将验证过的克隆与BacPAK6病毒DNA共转染至昆虫细胞中,通过AcMNPV序列二者进行重组,被感染的昆虫细胞就会随着病毒的扩增而产生重组蛋白质,最后使用TALON技术对其进行纯化。
 
实验例1
使用表达水母绿色荧光蛋白质(AcGFP1)的重组杆状病毒载体感染昆虫细胞。使用In-Fusion Ready BacPAK载体构建重组杆状病毒,用以表达带有N末端标签的AcGFP1。被感染的Sf9细胞能够表达高水平的AcGFP1并发出强烈的荧光,流式细胞术的检测结果显示,被感染细胞的平均荧光强度是未感染对照组的约440倍。
 
实验例2
使用BacPAK杆状病毒表达系统生产重组病毒制备蛋白质。通过共转染载体和BacPAK6病毒DNA (Bsu36 I消化)产生重组病毒,然后在Sf21细胞中进行扩增。感染48 hr后裂解细胞进行SDS PAGE检测。
泳道1:未被感染的Sf21细胞
泳道2:野生型AcMNPV病毒感染的Sf21细胞
泳道3:未重组BacPAK6病毒感染的Sf21细胞
泳道4:BacPAK8-GUS重组病毒感染的Sf21细胞
泳道5:纯化的CAT蛋白质
泳道6:BacPAK8-CAT重组病毒感染的Sf21细胞
泳道M:分子量marker
 
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