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产品选择指南

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Chaperone Competent Cells BL21 Series
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 9120 Chaperone Competent Cells BL21 Set 1 Set ¥2,613
Takara 9121 Chaperone Competent Cell pG-KJE8/BL21 100 μl x 10 ¥764
Takara 9122 Chaperone Competent Cell pGro7/BL21 100 μl x 10 ¥535
Takara 9124 Chaperone Competent Cell pG-Tf2/BL21 100 μl x 10 ¥1,106
Takara 9125 Chaperone Competent Cell pTf16/BL21 100 μl x 10 ¥1,232
无标题文档  
 
■ 制品内容(Code No.: 9120:100 μl × 3 × 6 种)
● Chaperone Competent Cells BL21 Set (Code No.: 9120)
1. Chaperone Competent Cells pG-KJE8/BL21 3 × 100 μl
2. Chaperone Competent Cells pGro7/BL21 3 × 100 μl
3. Chaperone Competent Cells pKJE7/BL21 3 × 100 μl
4. Chaperone Competent Cells pG-Tf2/BL21 3 × 100 μl
5. Chaperone Competent Cells pTf16/BL21 3 × 100 μl
6. TaKaRa Competent Cell BL21 3 × 100 μl
7. pUC19 DNA (0.1 ng/μl) 1× 10 μl
8. SOC medium* 18 × 1 ml
   
● Chaperone Competent Cells pG-KJE8/BL21 (Code No.: 9121)
● Chaperone Competent Cells pGro7/BL21 (Code No.: 9122)
● Chaperone Competent Cells pG-Tf2/BL21 (Code No.: 9124)
● Chaperone Competent Cells pTf16/BL21 (Code No.: 9125)
1. Competent Cell 10 × 100 μl
2. pUC19 DNA (0.1 ng/μl) 1× 10 μl
3. SOC medium* 10 × 1 ml
*SOC medium:       2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
 10 mM   MgSO4
 10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
     
 
■ 制品说明
Chaperone Competent Cell BL21 Series是由五种分别转化一种伴侣蛋白质粒 (Chaperone Plasmid Set (Code No.: 3340)) 的Escerichia coli BL21制成的感受态细胞。
众所周知,分子伴侣参与蛋白质折叠过程,且人们已经通过大量的实验研究来表明体内蛋白折叠机理。 本制品中含有五种类型的质粒(pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2、pTf16),每一种质粒都是能有效表达一组协同作用、共同参与蛋白折叠的被称作“Chaperone team”的分子伴侣。靶蛋白与其中一种“Chaperone team”共同表达,便可增加可溶性蛋白质的回收比率,而用通常方法,由于包涵体的形成,这些表达蛋白质常常是不可回收的。
E.coli BL21来源于B株,为Lon蛋白水解酶、ompT外膜蛋白水解酶缺陷型。因此,表达的外源蛋白质在该体系中有更高的稳定性。
当进行靶蛋白与“Chaperone team”共表达实验时,通常需要三步:
1. 用伴侣蛋白质粒转化宿主E.coli; 2. 用转化体制备感受态细胞;3. 用质粒转化感受态细胞并表达靶蛋白。如果使用本产品,只需一步转化就可构建靶蛋白与“Chaperone team”的共表达体系,因为使用的E.coli BL21感受态细胞已转化有一种伴侣蛋白质粒。另外,此感受态细胞有五种质粒,不含有伴侣蛋白质粒的TaKaRa Competent BL21也可作为对照。
每种E.coli BL21感受态细胞包括一种伴侣蛋白质粒,非常适合pCold DNA系列的表达。但该产品不适合于启动子为T7的蛋白质表达体系,如pET系列,因为,宿主E.coli BL21菌株不表达T7 RNA聚合酶。
注意:本产品不可用于电击法转化。
 
■ DNA序列
  pG-KJE8 DNA (Fasta形式的txt文件)
  pGRO7 DNA (Fasta形式的txt文件)
  pG-TF2 DNA (Fasta形式的txt文件)
  pKJE7 DNA (Fasta形式的txt文件)
  pTf16 DNA (Fasta形式的txt文件)
 
■ 保存
-80℃。
注意:如果不是-80℃保存,转化效率将会降低。此时,可在使用前用附带的pUC19做转化实验,确认转化效率。不能保存在液氮中。
 
■ 转化效率
Chaperone competent cells:转化1 ng pUC19,涂于Cm+和Amp+平板上进行筛选。
TaKaRa competent cell BL21:转化1 ng pUC19,涂于Amp+平板上进行筛选。
转化效率≥1×106 cfu/μg pUC19
 
■ Genotype
E.coli BL21 : F-, ompT, hsdSB (rB-mB-), gal, dcm
 
■ 注意事项
1. 从-80℃中只取出实验所用的感受态细胞,然后立即放入干冰/EtOH bath。开始实验前不要取出。
2. 可使用1.5 ml microtube替代FALCON tube,但可能会降低效率。
3. 使用100 μl感受态细胞转化时,高纯度DNA使用量不要超过10 ng,否则转化效率会降低。
4. 转化体系改变 (如感受态细胞使用量发生改变) ,或换用了其它tube等,需研讨转化条件 (如使用一般的1.5 ml tube时,请于42℃保温60秒)。
5. 除SOC培养基外,L-broth及φb-broth也可使用,但转化效率会有所下降。
6. 稀释时,使用SOC培养基。
7. L-broth plate : 成份 per liter  
  Tryptone 10 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1N NaOH调整到pH7.5,添加agar到1.5%,高压灭菌。
8. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。
9. 本制品中含有的伴侣蛋白质粒带有来源于pACYC的复制起点和氯霉素抗性基因 (Cmr),E.coli表达系统中可以使用常用的ColE1型、具氨苄抗性 (Ampr)筛选标记的表达载体,但不可与含有氯霉素抗性基因的表达质粒共同使用。
 

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