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机构用户解决方案

产品选择指南

技术服务信息

SPP System Set
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 3366 SPP System Set 1 Set ¥13,278
Takara 3367 SPP System I 1 Set ¥7,050
Takara 3368 SPP System II 1 Set ¥7,050
Takara 3369 SPP System III 1 Set ¥7,050
Takara 3370 SPP System IV 1 Set ¥7,050
 
■ 制品内容
SPP System Set (Code No.: 3366)  
1. SPP System Set
   pCold I (SP-4) DNA、pCold II (SP-4) DNA
   pCold III (SP-4) DNA、pCold IV (SP-4) DNA
各20 μg
2. pMazF DNA (20 ng/μl) 0.5 μg
3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl) 0.2 μg
   
SPP System IIV (Code No.: 33673370)  
1. pCold IIV (SP-4) DNA中一个(0.5 μg/μl) 20 μg
2. pMazF DNA (20 ng/μl) 0.5 μg
3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl) 0.2 μg
   
 
■ GenBank登录
      Accession No.
     pCold I (SP-4) DNA AB248600
     pCold II (SP-4) DNA AB248601
     pCold III (SP-4) DNA AB248602
     pCold IV (SP-4) DNA AB248603
 
■ 链长    
     pCold I (SP-4) DNA 4,407 bp
     pCold II (SP-4) DNA 4,392 bp
     pCold III (SP-4) DNA 4,377 bp
     pCold IV (SP-4) DNA 4,359 bp
 
■ 制品说明
根据美国新泽西州医学与牙科大学的井上正顺博士小组的研究,大肠杆菌的蛋白质MazF是一种能够识别并切断单链RNA特定序列 (ACA) 的核酸内切酶 (mRNA Interferase)。利用MazF可以抑制宿主蛋白质表达,只表达目的蛋白质。利用这一技术,开发了Single Protein Production (SPP) System。
在SPP System中,在保持氨基酸序列不变的情况下用非ACA序列置换目的基因中的ACA序列,然后与MazF基因共表达。大部分宿主蛋白的mRNA因为有ACA序列而被MazF分解,表达被抑制,但是目的基因的转录mRNA中不含有ACA序列,不能被MazF切断,从而使目的蛋白得到高效表达。由于目的蛋白质的不同,也有比单纯使用冷休克表达载体进行表达时表达量低的情况。构建SPP系统,首先需要通过化学合成或点突变的方法制备无ACA序列的目的基因。设计无ACA基因的时候,在确保氨基酸序列不变的情况下将ACA序列替换,同时加入必须的酶切位点。其次,将无ACA基因克隆至含有无ACA转录区域的pCold (SP-4) 载体中。至此,用于目的片段的SPP系统表达的载体准备完毕,将其与能够表达足量的MazF的pMazF载体共转化至E.coli中,形成了目的片段的SPP。
SPP System用的冷休克表达载体与pCold冷休克表达载体一样,根据TEE序列、His tag和Factor Xa酶切位点序列有无,分成4个载体,分别是pCold IIV (SP-4) DNA,pCold IV (SP-4)在多克隆位点的上游没有附加的序列。
 
■ 保存
-20℃
 
■ 特长
同位素标记方便:标记的目的蛋白质最大可达到宿主胞内新生蛋白质的90%。
使用宿主广泛:CspA启动子来源于大肠杆菌,所以大部分的大肠杆菌都可作为宿主使用。因为共表达用载体pMazF DNA的筛选标记是氯霉素,所以具有氯霉素抗性的大肠杆菌 (例如:Rosseta等)不能作为宿主使用。
 
■ 纯度
用于pCold (SP-4) DNA系列载体。
1. 用双脱氧测序法确认多克隆位点。
2. 确认多克隆位点上的限制酶Nde I, Sac I, Kpn I, Xho I, BamH I, EcoR I, Hind III, Sal I, Pst I 和Xba I只有一个酶切位点。
 
■ SPP System 原理图
 
■ SPP System冷休克表达载体图谱
  TEE序列 His tag序列 Factor Xa切断序列
pCold I (SP-4) DNA
pCold Ⅱ (SP-4) DNA ×
pCold Ⅲ (SP-4) DNA × ×
pCold Ⅳ (SP-4) DNA × × ×
 
 
■ MazF表达质粒pMazF DNA载体图谱
 

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