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■ 制品内容 |
SPP System Set (Code No.: 3366) |
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1. SPP System Set
pCold I (SP-4) DNA、pCold II (SP-4) DNA
pCold III (SP-4) DNA、pCold IV (SP-4) DNA |
各20 μg |
2. pMazF DNA (20 ng/μl) |
0.5 μg |
3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl) |
0.2 μg |
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SPP System I~IV (Code No.: 3367~3370) |
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1. pCold I~IV (SP-4) DNA中一个(0.5 μg/μl) |
20 μg |
2. pMazF DNA (20 ng/μl) |
0.5 μg |
3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl) |
0.2 μg |
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■ GenBank登录 |
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Accession No. |
pCold I (SP-4) DNA |
AB248600 |
pCold II (SP-4) DNA |
AB248601 |
pCold III (SP-4) DNA |
AB248602 |
pCold IV (SP-4) DNA |
AB248603 |
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■ 链长 |
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pCold I (SP-4) DNA |
4,407 bp |
pCold II (SP-4) DNA |
4,392 bp |
pCold III (SP-4) DNA |
4,377 bp |
pCold IV (SP-4) DNA |
4,359 bp |
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■ 制品说明 |
根据美国新泽西州医学与牙科大学的井上正顺博士小组的研究,大肠杆菌的蛋白质MazF是一种能够识别并切断单链RNA特定序列 (ACA) 的核酸内切酶 (mRNA Interferase)。利用MazF可以抑制宿主蛋白质表达,只表达目的蛋白质。利用这一技术,开发了Single Protein Production (SPP) System。
在SPP System中,在保持氨基酸序列不变的情况下用非ACA序列置换目的基因中的ACA序列,然后与MazF基因共表达。大部分宿主蛋白的mRNA因为有ACA序列而被MazF分解,表达被抑制,但是目的基因的转录mRNA中不含有ACA序列,不能被MazF切断,从而使目的蛋白得到高效表达。由于目的蛋白质的不同,也有比单纯使用冷休克表达载体进行表达时表达量低的情况。构建SPP系统,首先需要通过化学合成或点突变的方法制备无ACA序列的目的基因。设计无ACA基因的时候,在确保氨基酸序列不变的情况下将ACA序列替换,同时加入必须的酶切位点。其次,将无ACA基因克隆至含有无ACA转录区域的pCold (SP-4) 载体中。至此,用于目的片段的SPP系统表达的载体准备完毕,将其与能够表达足量的MazF的pMazF载体共转化至E.coli中,形成了目的片段的SPP。
SPP System用的冷休克表达载体与pCold冷休克表达载体一样,根据TEE序列、His tag和Factor Xa酶切位点序列有无,分成4个载体,分别是pCold I~IV (SP-4) DNA,pCold IV (SP-4)在多克隆位点的上游没有附加的序列。 |
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■ 保存 |
-20℃。 |
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■ 特长 |
同位素标记方便:标记的目的蛋白质最大可达到宿主胞内新生蛋白质的90%。
使用宿主广泛:CspA启动子来源于大肠杆菌,所以大部分的大肠杆菌都可作为宿主使用。因为共表达用载体pMazF DNA的筛选标记是氯霉素,所以具有氯霉素抗性的大肠杆菌 (例如:Rosseta等)不能作为宿主使用。 |
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■ 纯度 |
用于pCold (SP-4) DNA系列载体。
1. 用双脱氧测序法确认多克隆位点。
2. 确认多克隆位点上的限制酶Nde I, Sac I, Kpn I, Xho I, BamH I, EcoR I, Hind III, Sal I, Pst I 和Xba I只有一个酶切位点。 |
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■ SPP System 原理图 |
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■ SPP System冷休克表达载体图谱 |
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TEE序列 |
His tag序列 |
Factor Xa切断序列 |
pCold I (SP-4) DNA |
○ |
○ |
○ |
pCold Ⅱ (SP-4) DNA |
○ |
○ |
× |
pCold Ⅲ (SP-4) DNA |
○ |
× |
× |
pCold Ⅳ (SP-4) DNA |
× |
× |
× |
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■ MazF表达质粒pMazF DNA载体图谱 |
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