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机构用户解决方案

产品选择指南

技术服务信息

Brevibacillus Expression System Ⅱ
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
HIG HB200 Brevibacillus Expression System Ⅱ 1 Kit ¥10,854
HIG HB111 pNY326 DNA 10 μg ¥3,354
HIG HB112 pNCMO2 DNA 10 μg ¥3,354
HIG HB114 pNY326-BLA DNA 1 μg ¥1,903
HIG HB116 Brevibacillus Competent Cells 100 μl × 10 ¥3,004
HIG HB121 pNC-HisT DNA 10 μg ¥3,354
HIG HB122 pNC-HisF DNA 10 μg ¥3,354
HIG HB123 pNC-HisE DNA 10 μg ¥3,354
 
■ 制品内容
Brevibacillus Expression System II (Code No.: HB200)
1、Expression Vectors
     pNY326 DNA(Code No. HB111) 10 μg
     pNCMO2 DNA(Code No. HB112) 10 μg
2、Control Vector  
     pNY326-BLA DNA(Code No. HB114) 1 μg
3、Competent Cells  
     Brevibacillus Competent Cells 100 μl × 10
     MT medium 1 ml x 10
     Solution A 1 ml
     Solution B 1 ml x 2
   
Limited Use Label License: [L39]  
请先确认产品专利信息,订购时请填写专利确认书。
 
■ 保存
Expression Vectors:pNY326 DNA, pNCMO2 DNA -20℃
Control Vector:pNY326-BLA DNA -20℃
Competent Cells  
Brevibacillus Competent Cells -80℃
MT medium, Solution A, B -80℃
His-Tag Fusion Expression Vectors:  
pNC-HisT DNA (Code No. HB121) -20℃
pNC-HisF DNA (Code No. HB122) -20℃
pNC-HisE DNA (Code No. HB123) -20℃
 
■ 制品说明
Brevibacillus (Bacillus brevis ) Expression System是能够高效表达分泌型和优良蛋白质的表达系统,并能生产大量的异源蛋白质。本系统具有如下优点,尤其适用于生产分泌型蛋白质。
·生产大量的胞外分泌型蛋白质;
·无蛋白酶活性;
·生产有活性的蛋白质;
·易于培养和灭菌;
·简单的基因技术;
·安全的宿主菌。
使用本系统,不论是哪种基因起源(细菌,古细菌,真核生物),各种蛋白质(酶,抗原和细胞因子)都获得了高水平的表达。尤其是真核起源的分泌型蛋白质一般具有S-S键结构,本系统也能进行具有活性的表达,这是使用其他原核表达系统都很难做到的。
构建表达载体时,可以是E.coli 的穿梭载体,也可以是直接将DNA连接液转化到表达宿主中。然后目的蛋白质可通过转化后宿主菌的培养,收集培养上清液获得。不需要细菌匀浆破碎的过程,离心(去除菌细胞)后取上清,然后使用常规技术进行蛋白质的纯化。
 
■ 表达载体的选择
 
pNY326能够在B. choshinensis 细胞中复制,它的大小(3.4 kb)比pNCMO2(5.2 kb)小得多,且启动子活性也比pNCMO2弱。这样,即便是表达对宿主细胞有毒性的蛋白质,pNY326也能保持稳定,在某些情况下,也由于转化株的稳定生长可以获得高产量的蛋白质。稳定的产量使得pNY326尤其适合大规模培养。使用B.choshinensis 宿主可一步构建表达质粒,要保证足够高的转化效率,建议使用Brevibacillus Competent Cells (105 transformants/μg DNA; Code No.: HB116)。
pNCMO2是BrevibacillusE. coli 间的穿梭质粒。在E. coli 中构建表达质粒后,转入Brevibacillus 进行蛋白质表达。
宿主菌细胞壁蛋白质的P2启动子作为pNCMO2的表达启动子,由于P2启动子在E. coli 中不起作用,有利于克隆目的基因;但在Brevibacillus 中则是呈指数级别的强启动子,可有效生产蛋白质。
 
■ 融合His标签的表达载体的选择
pNC-HisT、pNC-HisF、pNC-HisE是BrevibacillusE. coli 间的穿梭质粒。在E. coli 中构建表达质粒后,转入Brevibacillus 进行蛋白质表达。
宿主菌细胞壁蛋白质的P2启动子作为pNCMO2的表达启动子,由于P2启动子在E.coli 中不起作用,有利于克隆目的基因;但在Brevibacillus 中则是呈指数级别的强启动子,可有效生产蛋白质。
pNC-HisT的His-Tag位于分泌信号肽和Thrombin切割位点的中间,pNC-HisF的His-Tag位于分泌信号肽和Factor Xa切割位点的中间, pNC-HisE的His-Tag位于分泌信号肽和肠激酶切割位点的中间,以便His-Tag可以从融合表达蛋白质中去除。
 
 

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