本制品是从全血中提取适合各种实验用的高纯度DNA的试剂盒。标准的操作规程是使用100 μl 的血液量,但实际操作时也可以处理更多量的血液。
本试剂盒含有GenTLE Solution I、II、III三种溶液。其中GenTLE Solution I 的作用是在破坏血细胞的同时,与核酸形成电中性的复合体。将该复合体离心收集并用GenTLE Solution II 清洗后,在沉淀中加入GenTLE Solution III,将DNA分离出来,然后再加入异丙醇将DNA沉淀回收。整个操作只需40分钟左右,便可提取高纯度的DNA,操作十分简单方便。由于GenTLE Solution I 具有破坏菌体和病毒粒子的作用,这对于处理那些担心有可能发生病源菌等污染的样品非常有利。而且GenTLE Solution I 与核酸生成的复合体牢固、稳定,便于样品的运输以及大量样品的处理。
本试剂盒既适用于尚未凝固的全血,又适用于经各种抗凝剂 (柠檬酸、EDTA、肝素) 处理过的全血,无论经过哪种抗凝剂处理,每100 μl 人的血液都能得到1 μg 以上的 DNA,其纯度A260/A280可达1.8~2.0。提取的DNA可用于PCR扩增和限制酶切等实验。 |
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■ 保存 |
室温*。
* GenTLE Solution I 和GenTLE Solution II 在20℃以下时有可能产生沉淀。此时,请按照注意事项1.和2.中所介绍的方法使沉淀完全溶解后使用。 |
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■ 实验操作流程图 |
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■ 注意事项 |
1. GenTLE Solution I 保存于20℃以下时,有时会出现沉淀,所以最好于20℃以上保存。如出现沉淀,可在50℃~55℃加热1~2小时,使沉淀完全溶解后使用。但是请注意, 60℃以上加热时,性能可能会有所下降。
2. GenTLE Solution II 出现沉淀时,请离心取上清使用。
3. GenTLE Solution I 有引起烧伤的危险。一旦溅入眼中或触到皮肤上,请立即用大量水冲洗。
4. 气温低时,GenTLE Solution I 的粘度增大,有时较难吸取,此时请于37℃加热数分钟后使用。
5. 为防止污染,分装时请使用新的灭过菌的Tip。
6. DNA的收量,会因抗凝剂的种类以及血液的保存条件的不同而各异。使用之前请务必阅读“采血后样品的处理、保存和DNA收量”部分。
7. 柠檬酸、EDTA、肝素三种抗凝剂均可使用。但肝素对酶反应有可能起阻害作用,采血时如没有特殊要求,请使用柠檬酸或EDTA处理血样。
8. 提取后的DNA,请用TE溶解,溶解后的DNA冷冻或4℃保存都可以。但如果用灭菌蒸馏水溶解,请务必冷冻保存,以防止DNA分解。
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