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产品选择指南

技术服务信息

T7 RNA Polymerase ver.2.0
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 2541A T7 RNA Polymerase ver.2.0 20,000 U ¥2,600
无标题文档
 
■ 制品内容(Code No. 2541A)
T7 RNA Polymerase ver.2.0 (200 U/μl) 20,000 U
10X T7 RNA Polymerase Buffer 1 ml
 
■ 制品说明
本制品以含有T7启动子序列的双链DNA为模板,以NTPs为底物,转录启动子下游区域,合成与模板互补的单链RNA。与附带的buffer一起用于体外转录 (IVT) 反应时,可以大量制备高质量的RNA。
本制品是T7 RNA Polymerase(Code No. 2540A/B)的升级产品,每个反应(20 μl体系)的RNA合成量提高约7倍(图1),性能更强!
图 1. 本制品与旧产品合成 FLuc RNA(约 1.9 kb)时的产量比较(20 μl 体系)
 
* 典型的 T7 启动子序列和转录起点
为 IVT 反应制备模板 DNA 的典型 T7 启动子序列如下所示。将转录起始点(+1 位置)的碱基设置为“G”对于高效的 RNA 合成很重要,但需要根据要合成的RNA序列和用于5′-cap修饰的Cap类似物的特点来设计模板,所以要根据目的准备模板DNA。
 
■ 保存
-20℃
 
■ 起源
Escherichia coli carrying a plasmid containing the gene for phage T7 RNA polymerase.
 
■ 性质
1. 分子量:约99 kDa
2. 辅因子:Mg2+
 
■ 活性定义
在 37℃,1 小时内使 1 nmol [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位(unit)。
 
■ 用途
1. 使用 Cap 类似物合成带帽的 mRNA
2. 长链非编码 RNA 的合成
3. guide RNA 的合成
4. siRNA前体的合成
5. 用于 RT-qPCR 的 RNA 标准模板的合成
6. 高标记RNA 探针的合成
 
■ 使用注意
1. 酶不要剧烈搅拌。
2. 当 dsDNA 模板、试剂、试管或微量移液器吸头被 RNase 污染时,合成的 RNA 的产量会降低或者出现片段化。在实验过程中应采取预防措施以避免 RNase 污染,例如戴一次性手套和使用专门用于 RNA 实验的试管和微量移液器吸头。
3. 为了合成长度一致的RNA,通常使用线性dsDNA(例如线性化质粒和 PCR 产物)用于体外转录。有报道称,模板DNA末端应为5’-突出或平端,以避免出现非特异性产物。
4. 缓冲液中的亚精胺会与核酸形成复合物并可能产生沉淀,因此模板 DNA 应在加酶之前即倒数第二步再加入反应体系中。
 
■ 使用例
 
37℃孵育 1-2 小时。