本酶催化相邻DNA链的5′-P末端和3′-OH末端以磷酸二酯键结合的反应,与T4 DNA Ligase作用相同。分子量为77,000,最适反应pH为7.5-8.0 (Tris-HCl buffer)。反应需NAD作辅酶。与T4 DNA Ligase可连接粘性末端和平末端相比,本酶只能催化突出末端DNA之间的连接,但如果在PEG及高浓度一价阳离子存在的条件下,也能连接平滑末端的DNA。与T4 DNA Ligase能将DNA的5′-P末端与RNA的3′-OH以及RNA的5′-P末端与DNA的3′-OH连接不同,本酶不能催化DNA与RNA以及RNA之间的连接。 |
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■ 保存 |
-20℃。 |
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■ 起源 |
Escherichia coli UT481 carrying the plasmid encoding the ligase |
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■ 活性定义 |
在20 μl的连接反应体系中,6 μg的λ DNA-Hind III在16℃下反应30分钟时,有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为一个活性单位 (U)。 |
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■ 用途 |
Okayama-Berg法克隆cDNA,实验操作中酶的用量约为50 units。 |