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■ 制品内容 |
E.coli CJ236 Competent Cells |
100 μl × 10 |
pUC119 plasmid ( 0.1 ng/μl) |
10 μl × 1 |
SOC Medium* |
1 ml × 10 |
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*SOC Medium: 2% |
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Tryptone |
0.5% |
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Yeast extract |
10 mM |
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NaCl |
2.5 mM |
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KCl |
10 mM |
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MgSO4 |
10 mM |
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MgCl2 |
20 mM |
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Glucose |
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■ 制品说明 |
Takara公司在Hanahan's method基础上进行了改良,制备出E.coli CJ236 Competent Cells,当1 ng pUC119转化100 μl 细胞时,转化效率可达1×107 cfu/μg。
E. coli CJ236 Competent Cells适用于制备含有dU的ssDNA。通过CJ236转化后富集的ssDNA,可用于Kunkel法进行定点突变。
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■ 细胞浓度 |
1 - 2×109 Bacteria/ml |
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■ Genotype |
E. coli CJ236 : dut1, ung1, thi-1, recA1 / pCJ105 (F' camr) |
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■ 保存 |
-80℃。
注意:如果不在-80℃下保存,转化效率将会降低。此时,在使用前,请使用附带的pUC119对照质粒来验证细胞的转化效率。不能液氮保存。 |
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■ 转化效率 |
转入1 ng 的pUC119,涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >1 x 107 cfu/μg pUC119 |
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■ 注意事项 |
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
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2. 可使用microcentrifuge tubes代替Falcon tubes (CORNING #352059或352057),但效率可能会降低。 |
3. 当使用100 μl感受态细胞时,加入不超过10 ng的高纯度DNA样品。否则转化效率会降低。 |
4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时,适当调整反应条件。例如,当使用microcentrifuge tubes时,42℃放置60秒。 |
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时,转化效率可能会降低。 |
·L-broth : |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
10 g |
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Yeast extract |
5 g |
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NaCl |
5 g |
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用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。 |
·φ b-broth: |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
20 g |
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Yeast extract |
5 g |
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MgSO4·7H2O |
5 g |
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用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。 |
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6. 稀释时使用SOC培养基。 |
7. 建议在选择培养基中加入 Chloramphenicol (30 μg/ml) 以保证F' 质粒稳定。 |
8. YT soft agar: |
Ingredient |
per 100 ml water |
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Tryptone |
0.8 g |
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Yeast extract |
0.5 g |
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NaCl |
0.5 g |
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用1 N NaOH调整pH到7.6,加入agar至浓度为0.6%,并高压灭菌。 |
9. YT-plate: |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
8 g |
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Yeast extract |
5 g |
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NaCl |
5 g |
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用1 N NaOH调整pH到7.5,加入agar至浓度为1.5%,并高压灭菌。 |
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10. 制备感受态细胞。 |
11. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。 |
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