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E. coli HB101 Electro-Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 9021 E. coli HB101 Electro-Cells 50 μl × 10 ¥391
 
■ 制品内容
E.coli HB101 Electro-Cells 50 μl × 10
pBR322 plasmid (10 pg/μl) 10 μl
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium:     2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
E. coli HB101是Takara Bio特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜,从而使外源DNA转入宿主细胞内的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大,尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。
E. coli HB101电转细胞可用于制备DNA文库或重组质粒的亚克隆。此电转细胞不能进行蓝白斑筛选。
 
■ 细胞浓度
>1×1010 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli HB101:supE44, △(mcrC-mrr), recA13, ara-14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20, xyl-5, mtl-1, leuB6, thi-1
 
■ 保存
-80℃。
注意: -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定,转化降低将会降低。请使用附带的pBR322照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 质量标准
转入10 pg 的pBR322,涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >5 x 108 cfu/μg pBR322
 
■ 注意事项
1. 将Electro-Cells从-80℃取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 当使用50 μl Electro-Cells时,添加不多于10 ng的高纯度样品DNA。否则会降低转化效率。
3. 当改变实验规模时,适当改变反应条件。
4. 导入分子量较大的DNA (>7 kb) 时,转化效率降低。
5. 使用TE buffer制备DNA样品。DNA样品溶液中高盐浓度可能会降低转化效率。
6. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时,转化效率可能会降低。
    ·L-broth : Ingredient per liter water  
  Tryptone 10 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH7.5左右并高压灭菌。
    ·φ b-broth: Ingredient per liter water  
  Tryptone 20 g  
  Yeast extract 5 g  
  MgSO4·7H2O 5 g  
    用1 N KOH调整pH7.5左右并高压灭菌。
    ·L-plates Ingredient per liter water  
  Tryptone 10 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH到7.5,添加agar到1.5%,高压灭菌。
7. Electro-Cells一旦解冻,不能再次冻结保存。如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中快速冻结,于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。