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| ■ 制品内容 |
| E.coli HB101 Electro-Cells |
50 μl × 10 |
| pBR322 plasmid (10 pg/μl) |
10 μl |
| SOC Medium* |
1 ml × 10 |
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| *SOC Medium: 2% |
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Tryptone |
| 0.5% |
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Yeast extract |
| 10 mM |
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NaCl |
| 2.5 mM |
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KCl |
| 10 mM |
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MgSO4 |
| 10 mM |
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MgCl2 |
| 20 mM |
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Glucose |
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| ■ 制品说明 |
E. coli HB101是Takara Bio特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜，从而使外源DNA转入宿主细胞内的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大，尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。
E. coli HB101电转细胞可用于制备DNA文库或重组质粒的亚克隆。此电转细胞不能进行蓝白斑筛选。 |
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| ■ 细胞浓度 |
| >1×1010 bacteria/ml |
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| ■ Genotype |
| E. coli HB101：supE44, △(mcrC-mrr), recA13, ara-14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20, xyl-5, mtl-1, leuB6, thi-1 |
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| ■ 保存 |
-80℃。
注意： -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化降低将会降低。请使用附带的pBR322照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。 |
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| ■ 质量标准 |
转入10 pg 的pBR322，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >5 x 108 cfu/μg pBR322 |
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| ■ 注意事项 |
1. 将Electro-Cells从-80℃取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
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| 2. 当使用50 μl Electro-Cells时，添加不多于10 ng的高纯度样品DNA。否则会降低转化效率。 |
| 3. 当改变实验规模时，适当改变反应条件。 |
| 4. 导入分子量较大的DNA (＞7 kb) 时，转化效率降低。 |
| 5. 使用TE buffer制备DNA样品。DNA样品溶液中高盐浓度可能会降低转化效率。 |
| 6. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。 |
| ·L-broth : |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
10 g |
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Yeast extract |
5 g |
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NaCl |
5 g |
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| 用1 N NaOH调整pH7.5左右并高压灭菌。 |
| ·φ b-broth: |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
20 g |
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Yeast extract |
5 g |
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MgSO4·7H2O |
5 g |
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| 用1 N KOH调整pH7.5左右并高压灭菌。 |
| ·L-plates |
Ingredient |
per liter water |
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Tryptone |
10 g |
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Yeast extract |
5 g |
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NaCl |
5 g |
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| 用1 N NaOH调整pH到7.5，添加agar到1.5%，高压灭菌。 |
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| 7. Electro-Cells一旦解冻，不能再次冻结保存。如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中快速冻结，于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。 |
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