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E.coli HST08 Premium Electro-Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 9028 E.coli HST08 Premium Electro-Cells 1 Set (50 μl × 10 支) ¥401
无标题文档
 
 
RNA起始合成cDNA PCR扩增目的片段 PCR产物纯化 In-Fusion无缝克隆 转化感受态细胞
 
TA克隆
基因组DNA  
粘性末端连接
 
 
■ 制品内容
E.coli HST08 Premium Electro-Cells 50 μl × 10
pUC19 plasmid ( 10 pg/μl) 10 μl
SOC medium* 1 ml × 10
*SOC medium:       2%   Bacto tryptone
 0.5%   Bacto yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
E. coli HST08 Premium Electro-Cells是Takara Bio特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜,从而使外源DNA转入宿主细胞内的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大,尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。 E.coli HST08是mrr, hsdRMS, mcrBC, mcrA缺失的菌株,这使得其可广泛应用于甲基化质粒的制备、基因文库的制作以及BAC文库的构建。即便转化较大的质粒,也可维持较高的转化效率和菌落生长率*。10 kb以上长片段DNA克隆和构建基因文库时,可与Takara DNA Ligation Kit LONG (Code No. : 6024) 一起使用,效果很好。
*:与其他相同基因型的感受态细胞相比较。
对于pUC系列质粒,可通过β-半乳糖苷酶的α-互补性,在培养基中添加X-gal进行蓝白筛选,以筛选阳性克隆。
X-Gal:5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
 
■ 细胞浓度
>1×1010 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli HST08 Premium: F-, endA1 , supE44 , thi -1 , recA1 , relA1, gyrA96 , phoA , Φ80d lacZ ΔM15,Δ(lacZYA - argF)U169 , Δ(mrr - hsdRMS - mcrBC), ΔmcrA , λ-
 
■ 保存
-80℃。
注意: -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定,转化降低将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 质量标准
[1] 转化效率
转入10 pg 的pUC19,涂于含有ampicillin的L-plate进行筛选。
转化效率 : >1 x 109 colonies/μg pUC19 plasmid
[2] β-半乳糖苷酶的α-互补性
转化pUC19 DNA时,含有100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出现蓝色菌落。
 
■ 注意事项
1. 将Electro-Cells从-80℃取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 当使用50 μl Electro-Cells时,高纯度样品DNA添加量不要超过10 ng,否则会降低转化效率。
3. 当使用50 μl Electro-cells时,DNA溶液添加量不要超过5 μl,否则会降低转化效率。
4. 当改变实验规模时,适当改变反应条件。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基,但转化效率会降低。
  ·L-broth:10 g Bacto tryptone, 5 g Bacto yeast extract, 5 g NaCl/1 L water,用1 N NaOH调整pH7.5左右并高压灭菌。
  ·φ b-broth:5 g Bacto yeast extract, 20 g Bacto tryptone, 5 g MgSO4·7H2O/1 L water,用1 N KOH调整pH7.5左右并高压灭菌。
6. L-plates: 10 g Bacto tryptone,5 g Bacto yeast extract,5 g NaCl/1 L water, 使用1 N NaOH调整pH7.5左右,添加agar 到浓度为1.5%, 定容1 L, 并高压灭菌。
7. 当使用X-Gal时,按照以下操作进行:
  ·将20 mg /ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml的比例加入到agar media中。
8. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。
 
 

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