|
|
|
|
|
■ 制品内容 |
E.coli HST08 Premium Electro-Cells |
50 μl × 10 |
pUC19 plasmid ( 10 pg/μl) |
10 μl |
SOC Medium* |
1 ml × 10 |
|
*SOC Medium: 2% |
|
Tryptone |
0.5% |
|
Yeast extract |
10 mM |
|
NaCl |
2.5 mM |
|
KCl |
10 mM |
|
MgSO4 |
10 mM |
|
MgCl2 |
20 mM |
|
Glucose |
|
|
■ 制品说明 |
E. coli HST08 Premium Electro-Cells是Takara Bio特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜,从而使外源DNA转入宿主细胞内的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大,尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。
E.coli HST08是mrr, hsdRMS, mcrBC, mcrA缺失的菌株,这使得其可广泛应用于甲基化质粒的制备、基因文库的制作以及BAC文库的构建。即便转化较大的质粒,也可维持较高的转化效率和菌落生长率*。10 kb以上长片段DNA克隆和构建基因文库时,可与Takara DNA Ligation Kit LONG (Code No. : 6024) 一起使用,效果很好。
*:与其他相同基因型的感受态细胞相比较。
对于pUC系列质粒,可通过β-半乳糖苷酶的α-互补性,在培养基中添加X-gal进行蓝白筛选,以筛选阳性克隆。
X-Gal:5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside |
|
■ 细胞浓度 |
>1×1010 bacteria/ml |
|
■ Genotype |
E. coli HST08 Premium: F-, endA1 , supE44 , thi -1 , recA1 , relA1, gyrA96 , phoA , Φ80d lacZ ΔM15,Δ(lacZYA - argF)U169 , Δ(mrr - hsdRMS - mcrBC), ΔmcrA , λ- |
|
■ 保存 |
-80℃。
注意: -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定,转化效率将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。 |
|
■ 质量标准 |
[1] 转化效率
转入10 pg 的pUC19,涂于含有ampicillin的L-plate进行筛选。
转化效率 : >1 x 109 colonies/μg pUC19 plasmid
[2] β-半乳糖苷酶的α-互补性
转化pUC19 DNA时,含有100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出现蓝色菌落。 |
|
■ 注意事项 |
1. 将Electro-Cells从-80℃取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
|
2. 当使用50 μl Electro-Cells时,高纯度样品DNA添加量不要超过10 ng,否则会降低转化效率。 |
3. 当使用50 μl Electro-cells时,DNA溶液添加量不要超过5 μl,否则会降低转化效率。 |
4. 当改变实验规模时,适当改变反应条件。 |
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基,但转化效率会降低。 |
·L-broth:10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl/1 L water,用1 N NaOH调整pH7.5左右并高压灭菌。 |
·φ b-broth:5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O/1 L water,用1 N KOH调整pH7.5左右并高压灭菌。 |
6. 当使用X-Gal时,按照以下操作进行: |
·将20 mg /ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml的比例加入到agar media中。 |
7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。 |
|
|