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E.coli JM109 Electro-Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 9022 E.coli JM109 Electro-Cells 50 μl × 10 ¥1,013
无标题文档
 
 
RNA起始合成cDNA PCR扩增目的片段 PCR产物纯化 In-Fusion无缝克隆 转化感受态细胞
 
TA克隆
基因组DNA  
粘性末端连接
 
 
■ 制品内容
E.coli JM109 Electro-Cells 50 μl × 10
pUC19 plasmid ( 10 pg/μl) 10 μl
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium:      2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
Electro-Cells是Takara Bio特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜,从而使外源DNA转入宿主细胞内的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大,尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。
由于E. coli JM109 Electro-Cells含有F' 质粒,可以作为M13噬菌体载体的宿主细胞,也可用于制作DNA文库或进行亚克隆。当转化pUC载体或转染M13噬菌体载体DNA时,重组体可以利用电转化细胞的β-半乳糖苷酶的α-互补性,通过添加X-Gal和IPTG很容易地筛选出来。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
IPTG : Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside
 
■ 细胞浓度
>1×1010 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli JM109: recA1 , endA1 , gyrA96 , thi -1 , hsdR17 (rk-mk+), e14-(mcrA- ) supE44 , relA1 , Δ (lac-proAB )/F'[traD36 , proAB+, lacIq, lacZ ΔM15]
 
■ 保存
-80℃。
注意: -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定,转化降低将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 质量标准
转入10 pg 的pUC19,涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >1 x 109 cfu/μg pUC19
 
■ 注意事项
1. 将Electro-Cells从-80℃取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 当使用50 μl Electro-Cells时,添加不多于10 ng的高纯度样品DNA。否则会降低转化效率。
3. 导入分子量较大的DNA (>7 kb) 时,转化效率降低。
4. 当改变实验规模时,适当改变反应条件。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时,转化效率可能会降低。
    ·L-broth : Ingredient per liter water  
  Tryptone 10 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH7.5并高压灭菌。
    ·φ b-broth: Ingredient per liter water  
  Tryptone 20 g  
  Yeast extract 5 g  
  MgSO4·7H2O 5 g  
    用1 N KOH调整pH7.5并高压灭菌。
6. 稀释时,使用“使用方法4”中加入的SOC培养基。
7. YT soft agar: Ingredient per 100 ml water  
  Tryptone 0.8 g  
  Yeast extract 0.5 g  
  NaCl 0.5 g  
    用1 N NaOH调整pH7.6,添加agar至浓度为0.6%,高压灭菌。
8. 制备感受态细胞。当DNA插入M13噬菌体载体克隆位点时,重组体可通过在YT-soft agar添加X-Gal 和IPTG进行筛选,因为非重组体存在于蓝斑中。
9. YT-plate: Ingredient per liter water  
  Tryptone 8 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH7.6,添加agar至浓度为1.5%,高压灭菌。
10. 当加入X-Gal或IPTG时,按照以下方法操作:
   ·加入100 mM IPTG,100 μl-300μl IPTG/100 ml agar medium 和 25 μl IPTG /3 ml soft agar。
   ·加入20 mg/ml X-Gal(溶解于二甲基甲酰胺)到agar medium中,比例为200 μl-300 μl /100 ml。若使用 soft agar,比例为50 μl/3 ml。
11. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中快速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。
 
 

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