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E.coli HST04 dam-/dcm- Competent Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 9129 E.coli HST04 dam-/dcm- Competent Cells 100 μl × 10 ¥407
 
■ 制品内容
E.coli HST04 dam-/dcm- Competent Cells 100 μl × 10
pUC19 plasmid (0.1 ng/μl) 10 μl
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium:      2%   Ttryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
Takara公司在Hanahan's method基础上进行了改良,制备出E. coli HST04 dam-/dcm- Competent Cells,当用1 ng pUC19转化100 μl细胞时,转化效率>1×106 cfu/μg。
E.coli HST04 dam-/dcm-是甲基化基因dam、dcm缺失的菌株,使DNA不被甲基化。使用本菌株转化所得到的质粒,可以被对dam、dcm甲基化敏感的限制酶切割。
另外,dam、recA双重突变的菌株是致死的,本菌株为recA+菌株。因此,易与带有同源序列的外源DNA发生重组。本制品只适用于转化已经构筑好的质粒, 而不适用于常规的克隆转化。
 
■ 细胞浓度
1-2×109 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli HST04 dam-/dcm-: F-, ara, △(lac-proAB) [Φ80dlacZ△M15], rpsL( str), thi, △(mrr-hsdRMS-mcrBC), △mcrA, dam, dcm
 
■ 保存
-80℃。
注意: 如果不在-80℃下保存,转化效率将会降低。此时,在使用前,请使用附带的pUC19 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 质量标准
转入1 ng 的pUC19 plasmid,涂于含有ampicillin的L-plate进行筛选。
转化效率 : >1 x 106 colonies/μg pUC19 plasmid
 
■ 注意事项
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (CORNING Code No. 352059 或 352057,等),但效率可能会降低。
3. 当使用100 μl感受态细胞时,加入的高纯度质粒DNA不要超过10 ng。否则转化效率会降低。
4. 当改变感受态细胞使用体积或tube类型时,适当调整反应条件。例如,当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时,42℃放置60秒而不是45秒。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基,转化效率可能会降低。
  ·L-broth:10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl,用1 N NaOH调整pH到7.5,使体系终体积为1 L,高压灭菌。
  ·φ b-broth:5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MaSO4·7H2O,用1 N KOH调整pH到7.5,使体系终体积为1 L,高压灭菌。
  ·L-plates: 10 g Tryptone,5 g Yeast extract,5 g NaCl/1 L water, 使用1 N NaOH调整pH到7.5,添加agar到1.5%,使体系终体积为1 L,高压灭菌。
6. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。
 
 

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