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E.coli CJ236 Competent Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 9053 E.coli CJ236 Competent Cells 1 Set (100 μl × 10 支) ¥502
无标题文档
 
■ 制品内容
E.coli CJ236 Competent Cells 100 μl × 10
pUC119 plasmid ( 0.1 ng/μl) 10 μl × 1
SOC medium* 1 ml × 10
*SOC medium:      2%   Bacto tryptone
 0.5%   Bacto yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
 10 mM   MgSO4
10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
Takara公司在Hanahan's method基础上进行了改良,制备出E.coli CJ236 Competent Cells,当1 ng pUC119转化100 μl 细胞时,转化效率可达1×107 cfu/μg。
E. coli CJ236 Competent Cells适用于制备含有dU的ssDNA。通过CJ236转化后富集的ssDNA,可用于Kunkel法进行定点突变。
 
■ 细胞浓度
1 - 2×109 Bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli CJ236 : dut1, ung1, thi-1, recA1 / pCJ105 (F' camr)
 
■ 保存
-80℃。
注意:如果不在-80℃下保存,转化效率将会降低。此时,在使用前,请使用附带的pUC119对照质粒来验证细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 转化效率
转入1 ng 的pUC119,涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >1 x 107 cfu/μg pUC119
 
■ 注意事项
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 可使用microcentrifuge tubes代替Falcon tubes (Becton Dickinson Code: 352059或352057,等),但效率可能会降低。
3. 当使用100 μl感受态细胞时,加入不超过10 ng的高纯度DNA样品。否则转化效率会降低。
4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时,适当调整反应条件。例如,当使用microcentrifuge tubes时,42℃放置60秒。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时,转化效率可能会降低。
   ·L-broth : Ingredient per liter water  
  Bacto tryptone 10 g  
  Bacto yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。
   ·φ b-broth: Ingredient per liter water  
  Bacto tryptone 20 g  
  Bacto yeast extract 5 g  
  MgSO4·7H2O 5 g  
    用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。
6. 稀释时使用SOC培养基。
7. 建议在选择培养基中加入 Chloramphenicol (30 μg/ml) 以保证F' 质粒稳定。
8. YT soft agar: Ingredient per 100 ml water  
  Bacto tryptone 0.8 g  
  Bacto yeast extract 0.5 g  
  NaCl 0.5 g  
    用1 N NaOH调整pH到7.6,加入agar至浓度为0.6%,并高压灭菌。
9. YT-plate: Ingredient per liter water  
  Bacto tryptone 8 g  
  Bacto yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH到7.5,加入agar至浓度为1.5%,并高压灭菌。
10. 制备感受态细胞。
11. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。
 
 

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