我们使用cookie改善您的浏览体验并提供有意义的内容。请阅读我们的cookie协议
收藏我们 在线订购
     

机构用户解决方案

产品选择指南

技术服务信息

当前位置:首页> 产品选择指南 > cDNA合成 & 克隆 > 感受态细胞 > E.coli JM109 Competent Cells
E.coli JM109 Competent Cells
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 9052 E.coli JM109 Competent Cells 100 μl × 10 ¥300
无标题文档
 
 
RNA起始合成cDNA PCR扩增目的片段 PCR产物纯化 In-Fusion无缝克隆 转化感受态细胞
 
TA克隆
基因组DNA  
粘性末端连接
 
 
■ 制品内容
E.coli JM109 Competent Cells 100 μl × 10
pBR322 plasmid ( 0.1 ng/μl) 10 μl
SOC Medium* 1 ml × 10
*SOC Medium:     2%   Tryptone
 0.5%   Yeast extract
 10 mM   NaCl
 2.5 mM   KCl
  10 mM   MgSO4
  10 mM   MgCl2
 20 mM   Glucose
 
■ 制品说明
Takara在Hanahan's method基础上进行了改良,制备出E.coli JM109 Competent Cells。
由于E. coli JM109 Competent Cells含有F' 质粒,可以作为M13噬菌体载体的宿主细胞,也可用于制作DNA文库或进行亚克隆。当转化pUC载体或转染M13噬菌体载体DNA时,重组体可以利用感受态细胞的β-半乳糖苷酶的α-互补性,通过添加X-Gal和IPTG很容易地筛选出来。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside
IPTG : Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside
 
■ 细胞浓度
1-2×109 bacteria/ml
 
■ Genotype
E. coli JM109: recA1 , endA1 , gyrA96 , thi-1 , hsdR17 (rk-mk+), e14-(mcrA- ) supE44 , relA1 , Δ(lac-proAB )/F'[traD36 , proAB+, lacIq, lacZΔM15]
 
■ 保存
-80℃。
注意: 如果不在-80℃下保存,转化效率将会降低。此时,在使用前,请使用附带的pBR332 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。
 
■ 转化效率
转入1 ng 的pBR322,涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >1 x 108 transformants/μg pBR322
 
■ 注意事项
1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 可使用1.5 ml的microcentrifuge tubes代替14 ml的圆底tubes (BD company Code: 352059 或 352057等),但效率可能会降低。
3. 当使用100 μl感受态细胞时,加入的高纯度DNA样品不超过10 ng。否则转化效率会降低。
4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时,适当调整反应条件。例如,当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时,42℃放置60秒,而不是45秒。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时,转化效率可能会降低。
    ·L-broth : Ingredient per liter water  
  Tryptone 10 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH7.5并高压灭菌。
    ·φ b-broth: Ingredient per liter water  
  Tryptone 20 g  
  Yeast extract 5 g  
  MgSO4·7H2O 5 g  
    用1 N KOH调整pH7.5并高压灭菌。
6. YT soft agar: Ingredient per 100 ml water  
  Tryptone 0.8 g  
  Yeast extract 0.5 g  
  NaCl 0.5 g  
    用1 N NaOH调整pH7.6,添加agar至浓度为0.6%,并高压灭菌。
7. 制备宿主细胞。
8. L-plate: Ingredient per liter water  
  Tryptone 10 g  
  Yeast extract 5 g  
  NaCl 5 g  
    用1 N NaOH调整pH到7.5,加入agar至浓度为1.5%,并高压灭菌。
9. 当加入X-Gal或IPTG时,按照以下方法操作:
   ·将100 mM IPTG按100-300 μl/100 ml的比例加入到agar medium 中,若使用soft agar,比例为 25 μl/3 ml。
   ·将20 mg /ml X-Gal(溶解于二甲基甲酰胺)按200-300 μl/100 ml的比例加入到agar medium中,若使用soft agar,比例为50 μl/3 ml。
10. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是,如果再次冻结不可避免,将细胞置于干冰/乙醇中快速冷冻,置于-80℃保存。但是,转化效率可能会降低至少一个数量级。
 
 

浏览此产品的客户还对以下信息感兴趣