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当前位置:首页> 产品选择指南 > cDNA合成 & 克隆 > In-Fusion无缝克隆 > In-Fusion Snap Assembly Master Mix
In-Fusion Snap Assembly Master Mix
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 638947 In-Fusion® Snap Assembly Master Mix 10 Rxns ¥1,155
Clontech 638948 In-Fusion® Snap Assembly Master Mix 50 Rxns ¥5,204
Clontech 638949 In-Fusion® Snap Assembly Master Mix 250 Rxns ¥20,747
无标题文档
 
 
RNA起始合成cDNA PCR扩增目的片段 PCR产物纯化 In-Fusion无缝克隆 转化感受态细胞
 
TA克隆
基因组DNA  
粘性末端连接
 
 
效率更高、重复性更好的无缝克隆试剂登场了!
In-Fusion Snap Assembly Master Mix是在In-Fusion HD Cloning Kit基础上升级的新产品,与其他公司同类产品相比克隆效率更高。
In-Fusion HD Cloning Kit与其他公司同类产品对比数据参见:In-Fusion与其他公司的无缝克隆产品对比有何不同?
 
■ 制品说明
In-Fusion Snap Assembly是Takara推出的新一代无缝克隆试剂,延续了上一代HD系列产品的优点,仅通过15分钟反应,即可将1个或多个PCR片段按照设计要求插入到任意载体的任意位置,对于待克隆的PCR片段,不需要进行限制酶酶切、磷酸化及末端平滑化等处理。Snap Assembly系列的实验效率和一致性均超过HD系列产品,更擅长多片段克隆以及高通量实验。
 
■ 制品内容
· 5X In-Fusion Snap Assembly Master Mix
· linearized pUC19 Control Vector
· 2 kb Control Insert
※ PCR产物纯化需要另外准备纯化试剂,例如可使用TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0(Code No. 9762)纯化柱。
※ 试剂盒中不附带感受态细胞,转化实验请使用高效率的感受态细胞,例如 E. coli HST08 Premium Competent Cells(Code No. 9128) Stellar感受态细胞
※ 扩增目的片段及对载体进行反向PCR时建议使用高保真酶 PrimeSTAR Max DNA Polymerase(Code No.:R045A/B)。
 
■ 制品特点
· 可在任意载体的任意位置进行定向克隆
· 操作简单方便,无需进行反复的酶切连接
· 对于50 bp~15 kb的插入片段,克隆效率可超过95%
· 与现有的In-Fusion HD Cloning Kit相比,多片段克隆效率大幅提升
· 在高正确率的基础上,转化后得到的菌落数比其他公司的同类产品更多
 
■ In-Fusion原理
In-Fusion技术利用In-Fusion酶,通过识别DNA片段(例如PCR片段和线性化载体)末端15 bp的同源序列来实现高效、准确地融合。这15 bp的同源序列可在设计目的片段扩增引物时,使用我们的在线引物设计工具进行设计。In-Fusion酶从线性DNA链的3'末端切割核苷酸,这样,两个DNA片段之间便形成互补碱基对,可通过退火使片段连接起来。通过这一原理可将单个或多个片段克隆到载体中,而无需亚克隆。除此之外,In-Fusion技术还可以应用于突变导入、基因合成、特定基因结构域改变等。
 
图1. In-Fusion克隆标准工作流程示意图(适用所有In-Fusion克隆试剂盒)。
 
■ In-Fusion引物设计
In-Fusion克隆用引物的设计与目的片段PCR扩增用引物的设计基本相同。不同之处是需要在特异性引物的5'末端添加15个与载体末端序列相同的碱基(参考下图)。Takara为您提供了方便的在线引物设计工具,欢迎使用。
 
■ 对比实验例
实验例1
图2. In-Fusion Snap Assembly和In-Fusion HD性能比较。分别使用In-Fusion Snap Assembly和In-Fusion HD将五个不同的插入片段(大小从405 bp到1,005 bp不等)同时克隆到一个经反向PCR线性化的2.7 kb的载体中,每组克隆反应重复三次。两个反应系统除了酶预混液不同之外,扩增引物和其他试剂全部相同。转化涂菌后显示Snap Assembly组长出的菌落数是HD组的4倍,挑取10个转化菌落,进一步使用Sanger测序法进行验证,结果显示二者正确率均超过90%。
 
实验例2
数据来源于Takara Bio USA, Inc.
图3. In-Fusion Snap Assembly与其他公司同类产品A的比较(使用反向PCR的方法线性化载体)。 将3.8 kb的片段(图A)或34.2 kb的腺病毒片段(图B)克隆到通过反向PCR线性化的2.7 kb的载体中,每组克隆反应重复三次。引物按照所使用试剂厂家的要求进行设计。 转化涂菌后显示In-Fusion Snap Assembly组长出的菌落数是A产品组的2倍,各挑取20个转化菌落,再使用Sanger测序法和菌落PCR的方法分别进行验证,结果显示In-Fusion Snap Assembly的正确率超过95%。
 
实验例3
数据来源于Takara Bio USA, Inc.
图4.In-Fusion Snap Assembly与其他公司同类产品A的比较(使用限制酶酶切的方法线性化载体)。将3.8 kb的片段克隆到通过限制酶酶切线性化的标准载体中,载体因使用不同的限制酶而产生三种不同末端,5'突出端(图A),平端(图B)和3'突出端(图C),每组克隆反应重复三次,引物按照所使用试剂厂家的要求进行设计。转化涂菌后显示In-Fusion Snap Assembly组长出的菌落数是A产品组的5-16倍,根据载体末端类型的不同而不同。各挑取20个转化菌落,进一步使用Sanger测序法进行验证,结果显示In-Fusion Snap Assembly的正确率超过95%。
 
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页面更新:2022-07-04 10:37:34