TaKaRa Taq*1 (5 U/ μl) |
50 μl (250 U) |
dNTP Mixture*2 (各2.5 mM) |
1.28 ml |
10 × PCR Buffer (Mg2+ plus)
100 mM Tris-HCl(pH8.9)
500 mM KCl
15 mM MgCl2
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1 ml |
10 × PCR Buffer (Mg2+ Free)
100 mM Tris-HCl(pH8.9)
500 mM KCl
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1 ml |
MgCl2 (25 mM) |
1 ml |
Control Template (1 μg/ml λ DNA) |
100 μl |
Control Primer 1*3 (20 pmol/μl) |
50 μl |
Control Primer 2*3 (20 pmol/μl) |
50 μl |
Control Primer 3*3 (20 pmol/μl) |
50 μl |
λ-EcoT14 I Marker*4 (100 ng/μl) |
40 μl |
6 × Loading Buffer*5 |
1 ml |
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*1 TaKaRa Taq™酶说明 (5 U/μl) |
【酶贮存液】 |
20 mM Tris-HCl(pH8.0),100 mM KCl,0.1 mM EDTA,1 mM DTT,0.5% Tween20,0.5% NP-40,50% Glycerol。 |
【活性定义】 |
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74℃、pH9.3、30分钟内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位 (U)。 |
【Reaction mixture】 |
25 mM |
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TAPS (pH9.3,25℃) |
50 mM |
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KCl |
2 mM |
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MgCl2 |
0.1 mM |
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DTT |
200 μM |
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each dATP·dGTP·dCTP |
100 μM |
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[3H]-dTTP |
0.25 mg/ml |
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activated salmon sperm DNA |
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*2 dNTP Mixture (各2.5 mM) |
dNTP Mixture无需稀释,可直接用于PCR。
Form:溶于水 (钠盐),pH7-9
纯度:每种dNTP≥98%
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*3 Control Primer序列 |
Control Primer 1 |
5'-GATGAGTTCGTGTCCGTACAACT-3' |
Control Primer 2 |
5'-CCACATCCATACCGGGTTTCAC-3' |
Control Primer 3 |
5'-GGTTATCGAAATCAGCCACAGCGCC-3' |
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* 使用Control Primer 1、2时,可以扩增Control Template (λ DNA)的6,012 bp DNA片段。使用Control Primer 1、3时,可以扩增Control Template (λ DNA)的500 bp DNA片段。
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*4 λ-EcoT14 I Marker |
此marker是用限制性内切酶EcoT14 I分解λcl857 Sam7 DNA得到的。由DNA片段19,329 bp;7,743 bp;6,223 bp;4,254 bp;3,472 bp;2,690 bp;1,882 bp;1,489 bp;925 bp;421 bp;74 bp等组成。由于λ DNA分解的末端片段与COS end相连,需加热处理(60℃,5 min.)。 |
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*5 6×Loading Buffer的组成 |
36% |
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甘油 |
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30 mM |
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EDTA |
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0.05% |
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溴酚兰 |
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0.035% |
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二甲苯青 |
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