| 测序样品的提供 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ 质粒DNA的测序 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ◇ Sample形态为提纯质粒时 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 请注明载体名称及结构情况、插入片段的长度及插入片段的酶切位点等情况，请提供1 μg以上提纯的质粒DNA (浓度大于50 ng/μl)。如果提供质粒偏少需要我公司转化制备时，收取质粒转化制备费用。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ PCR产物直接测序 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ◇ Sample形态为纯化后的PCR产物时 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 请提供切胶回收纯化后的PCR产物500 ng以上 (浓度大于25 ng/μl)，并请提供浓度 (浓度须正确) 大于3.2 pmol/μl的测序引物 20 μl以上。此外，请注明PCR产物的长度、引物的具体序列等情况。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ◇ Sample形态为未纯化的PCR产物时 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 请提供1-5 μg的未纯化PCR产物, 我们负责纯化测序 (另收取纯化费)。同时请提供浓度 (浓度须正确) 大于3.2 pmol/μl的测序引物 20 μl以上, 并请注明PCR产物的长度、引物的具体序列等情况。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ◇ Sample形态为PCR模板DNA时 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 请提供适量的模板DNA及用于PCR扩增的引物 (浓度大于3.2 pmol/μl约100 μl)。我公司负责PCR反应和PCR产物的纯化及测序 (需收取PCR反应费及PCR产物的纯化费) 。此外，请注明PCR产物的长度及引物的具体序列等情况。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ◇ 注意事项 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 1. PCR产物直接测序成功的关键是PCR产物的纯度，所以我公司提倡切胶回收PCR产物。如果有几条PCR产物长度相近，用电泳胶也无法分开，此时的PCR产物便无法直接测序。这种情况建议把PCR产物克隆后测序。 2. PCR产物直接测序成功的另一要因是引物，不是能做PCR反应的引物便能测序。测序用引物要求较高，引物的3' 端必须与模板完全匹配，含有Mix碱基的引物一般不能测序 (特别是3' 端)。此外，测序引物长度一般为20个碱基左右，GC含量必须在 50-60%左右。而且，用于测序的引物一定要纯，纯度必须大于90%。 3. 在PCR扩增时，难以扩增 (扩增后的PCR带较弱) 的PCR产物在测序时一般成功率较低。 4. 小于150 bp的PCR产物直接测序效果不好，请克隆后测序。 |
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| ■ Cosmid、Fosmid中插入DNA片段的测序 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 请提供纯化后的DNA大于5 μg (因每个测序反应的用量需500 ng以上)。DNA必须注明浓度，并请提供浓度 (浓度须正确) 大于5 pmol/μl的引物10 μl以上。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ 预混合样品测序 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 将测序样品和引物按照要求的浓度和量，事先混合好，取12 μl指定浓度的DNA模板和3 μl的引物（浓度为5 pmol/μl）混合（若使用公司的通用引物，只需要按照所要求的浓度提供12 μl的DNA模板就可以）。样品和引物混合方法，请参考下表： | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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页面更新：2015-10-30 10:33:03
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