| DNA 合成的原理 |
| Oligo DNA的人工化学合成始于50年代初期，1980年，全自动的固相DNA合成仪面市后，使得快速、高效合成Oligo DNA成为可能，这大大地推动了生物工程技术的蓬勃发展。现在一般都采用β-乙腈亚磷酰胺化学合成Oligo DNA，合成时从3' →5' 方向进行，通常3' 端的第一个碱基结合在Glass担体 (Controlled Pore Glass，CPG)上。合成的详细过程见下图，现简要说明如下： 1. Step1：脱掉附加在CPG担体上的第一个碱基5' -OH基团上的保护基 (DMTr)，准备附加下一个新的碱基； 2. Step2：活化新的碱基单体 (Phosphoramidite)，准备与第一个碱基进行反应； 3. Step3：第二个碱基与第一个碱基发生偶联反应； 4. Step4：将没有反应的第一个碱基的5' -OH加帽封死 (Capping)，使其不再进一步参与反应； 5. Step5：将核苷亚磷酸酯氧化成更稳定的核苷磷酸酯 (即将三价磷氧化成五价磷)。 6. 重复进行Step1～Step5的循环，直至合成完所需的Oligo DNA序列。 7. 合成结束后，将Oligo DNA分子从CPG上切下，再进行进一步的纯化。 |
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| 图1 Oligo DNA合成原理。N1代表第一个碱基，N2代表第二个碱基，依此类推。 |
页面更新：2017-04-14 09:33:30
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