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■ 制品内容 (5 次量) |
Exonuclease Ⅲ (180 U/μl) |
10 μl |
Exo Ⅲ Buffer |
500 μl |
Mung Bean Nuclease (25 U/μl) |
20 μl |
Mung Bean Nuclease buffer |
500 μl |
Klenow fragment (2 U/μl) |
10 μl |
Klenow Buffer |
250 μl |
Ligation Solution A |
500 μl |
Ligation Solution B |
60 μl |
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■ 制品说明 |
本制品是对M13mp系列噬菌体载体 (mp18、19) 和pUC系列质粒载体 (pUC18、19和pUC118、119) 多克隆位点中插入的数千个碱基片段进行测序的试剂盒。
同时本制品也可有效用于DNA片段末端的单向缺失。
本制品是Steven Henikoff法 (Gene (1984)28、351~359) 和Celeste Yanision-Perron法(Gene(1985)33、103~119)的改良品。
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■ 保存 |
-20℃。 |
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■ 长链DNA测序原理
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本制品是利用Exonuclease Ⅲ 的3’→5’外切酶活性制作连续的单向缺失DNA片段的试剂盒。Exonuclease Ⅲ从5’突出末端或平滑末端的3’端连续降解核苷酸,但对于3’突出末端的降解活性较低。基本上,插入的目的DNA是被连续消化的,但测序引物的退火结合位点通过连接4碱基的3’突出的限制酶切位点而避免被消化。分取不同时间间隔的Exonuclease Ⅲ反应液,用Mung Bean nuclease/buffer cocktail处理,终止Exonuclease Ⅲ反应并同时切断互补链的5’突出末端。使用Klenow Fragment进行平滑化后,使用Ligation cocktail进行连接环化,转化到感受态细胞中。 |
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