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DNA Ligation Kit <Mighty Mix>
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Takara 6023Q DNA Ligation Kit <Mighty Mix> 1 Kit ¥150
Takara 6023 DNA Ligation Kit <Mighty Mix> 1 Kit ¥501
无标题文档
 
 
RNA起始合成cDNA PCR扩增目的片段 PCR产物纯化 In-Fusion无缝克隆 转化感受态细胞
 
TA克隆
基因组DNA  
粘性末端连接
 
 
■ 制品内容 (Code No.: 6023)
Ligation Mix 150 μl × 5
按每次反应使用7.5 μl 进行计算,可使用100次。
 
■ 制品说明
DNA片段连接反应频繁用于基因工程实验操作中。DNA的连接通常使用T4 DNA Ligase,但DNA片段的末端形状对T4 DNA Ligase连接反应速度影响很大。因此,根据DNA片段末端形状需要调整酶的添加量和反应时间。本公司研发的DNA Ligation Kit,不需要调整酶添加量和反应时间,可简便、快速地进行DNA连接反应。
DNA Ligation Kit〈Mighty Mix〉是以往DNA Ligation Kit 的升级产品,连接效率高。本制品具有以下特点:
1) 预混型
是酶和Buffer的预混型试剂,只需在DNA中加入Ligation Mix溶液即可高效完成连接反应,操作简便。本制品反复冻融后,反应性能仍然稳定。
2) 也适用于平滑末端和TA克隆
不仅适用于粘性末端连接,也可以高效地进行平滑末端的DNA连接和TA克隆。
3) 连接反应仅需5分钟
25℃反应5分钟即可完成插入片段与质粒载体的连接,节省实验时间。
 
DNA Ligation Kit的反应液量和反应条件
克隆编号 DNA溶液:Ligation Mix (体积比) 反应条件
[1] 质粒载体中插入外源DNA片段
[标准操作流程]
[快速操作流程]
1:1
 
16℃,30分钟
25℃,5分钟
[2] PCR产物的T载体克隆 1:1 16℃,30分钟
[3] 线性DNA的分子内连接 (自身环化) 1:1 16℃,30分钟
[4] Linker Ligation,Adaptor Ligation质粒载体中插入linker DNA cDNA与连头 (Linker、 Adaptor) 连接
 
1:1
1:2
16℃,30分钟
[5] λ噬菌体中插入外源DNA片段(体外包装) 1:2 26℃,10分钟
* 说明书提供的实验结果是表中使用DNA Ligation Kit获得的实验数据,仅供参考。
 
保存
-20℃。使用前在冰上融化 (5-10分钟),吸打混匀。已证实反复冻融50次对反应性能没有影响。
 
■ DNA Ligation Kit的操作原理图
 
 
使用注意
1. DNA Ligation是-20℃保存的冷冻品,反复冻融不会失活。使用前在冰上融化,吸打混合。
2. 使用本试剂盒获得的DNA连接反应液,可直接用于琼脂糖凝胶电泳。如果进行聚丙烯酰胺凝胶电泳时,建议乙醇沉淀后再进行电泳。
3. DNA连接反应液直接进行苯酚抽提时,反应液会出现白色浑浊。
4. DNA连接反应后进行乙醇沉淀处理时,向反应液中加入1/10体积的3 M CH3COONa (pH5.2) 或1/20体积的5 M NaCl和2-2.5倍体积的无水乙醇,-20℃静置20分钟或-80℃静置10分钟后,4℃离心回收DNA。DNA含量较少时,加入Carrier使沉淀效果更好。
 
 

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