本制品是采用TB Green嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。本制品将适用于快速PCR反应的突变型Taq DNA聚合酶和抑制引物二聚体的因子组合,优化了反应液组成,在保证特异性的同时,实现快速PCR反应和在宽广的动态定量区域内对靶基因进行准确定量、检测,重复性好。此外, 2X Premix试剂中,已预先添加了Tli RNaseH(耐热性RNaseH)和UNG,以cDNA作为模板进行PCR反应时,Tli RNaseH可以很好地抑制由于cDNA中残存mRNA对PCR反应造成的阻害作用,UNG可避免扩增过程中的交叉污染。
本制品是2X浓度的Premix型试剂,预先混有通用参比染料和可视化色素,无需额外在仪器中添加参比试剂以校正孔间荧光信号,可视化色素可以最大限度地减少操作错误。
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■ 保存 |
4℃。
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注意: |
4℃可保存3个月。 |
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避光保存,避免污染。 |
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长期保存请置于-20℃,一旦开始使用请于4℃保存并在3个月之内使用完。 |
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■ 产品特点 |
♦ 高速反应
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突变型Taq DNA聚合酶,适用于延伸时间10秒的快速PCR反应程序 |
♦ 高特异性
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buffer添加了引物二聚体抑制因子,最大限度抑制引物二聚体的形成 |
♦ 高荧光信号
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荧光信号值更高,扩增曲线&溶解曲线线型更好,信噪比更高 |
♦ 高稳定性
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实验验证的多个基因,反应液配置后室温放置48小时仍具有高稳定性,较长操作时间也可获得稳定结果 |
♦ 各仪器平台通用
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预混通用参比染料,无需额外添加校正孔间荧光信号的参比染料 |
♦ 防止carryover污染
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预混UNG,避免扩增过程中交叉污染导致的假阳性。PCR程序中使用或不使用可自由选择 |
♦ 防止加样错误
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预混可视化色素,减少操作错误 |
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■ 试剂盒特长 |
1. 通过Real Time PCR反应,可以快速、准确地对目的基因进行检测、定量。
2. 本制品是预先混有TB Green的2X 浓度的Premix试剂,只需加入引物、模板、灭菌水便可通过嵌合荧光检测法进行Real Time PCR反应。
3. PCR反应使用的是可进行快速PCR反应的突变型Taq HS。缓冲buffer结合了引物二聚体抑制因子,适用于实时PCR。最大限度的抑制了引物二聚体的形成,可以在较短的延伸时间内,以高灵敏度的S/N比进行检测。
4. 在2X Premix试剂中,预先添加了耐热性RNaseH (Tli RNaseH)和UNG,Tli RNaseH可以很好地抑制以cDNA作为模板进行PCR反应时,由于cDNA中残存mRNA对PCR反应造成的阻害作用,UNG可避免扩增过程中的交叉污染。
5. 预先在2X预混试剂中添加了通用参比染料和可视化色素,无需在仪器中额外添加参比试剂以校正孔间荧光信号。 |
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■ 注意事项 |
以下为使用本试剂盒时的注意事项,使用前一定认真阅读。 1. 进行Real Time RT-PCR反应时,反转录反应推荐如下试剂。与本制品组合使用,可以得到可信度高的结果。
PrimeScript™ RT reagent Kit (Perfect Real Time) (Code No. RR037Q/A/B)
PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time) (Code No. RR036Q/A/B)
PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)(Code No. RR047A/B)
2. 使用前,请上下轻轻颠倒混匀,避免产生气泡,试剂混匀后再使用。试剂混合不均匀会造成反应效果不佳。
(1)
请勿涡旋振荡混匀。
(2) TB Green Premix Ex Taq II FAST qPCR (2X)在-20℃保存时,可能会产生白色或淡黄色的沉淀。可用手握缓慢溶解,或于室温短时间避光放置后,上下颠倒混匀直至沉淀全部消失。
(3) 沉淀会导致试剂组份不均匀,必须混匀后再使用。
3. 配制反应液时,试剂请于冰上放置。
4. 本制品中含有荧光染料TB Green,配制PCR反应液时应避免强光照射。使用后的TB Green Premix Ex Taq II FAST qPCR (2X) 应立即避光存储。
5. 反应液的配制、分装请一定使用新的一次性枪头、尽量避免样品间的污染。
6. 如果定量PCR仪器无法设置延伸时间为10s的快速反应程序,请使用仪器可以设置的最短延伸时间(>10s)。 |