本制品是采用TB Green嵌合荧光法进行One Step RT-PCR反应的专用试剂。使用本制品进行Real Time RT-PCR反应可在同一反应管内连续进行,操作简单,并能有效防止污染。本反应体系由于可以对扩增产物进行实时检测,大大提高了检测灵敏度,并省略了PCR反应后的电泳步骤,非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。
制品中使用了适合于Real Time RT-PCR的反转录酶PrimeScript RTase和高效的PCR热启动酶TaKaRa Ex Taq® HS,具有高扩增效率和高扩增特异性,能进行稳定的Real Time One Step RT-PCR反应。本制品的Buffer经过改良,使反应的特异性比使用One Step TB Green PrimeScript RT-PCR Kit(Perfect Real Time)(Code No. RR066A)更高。另外,反应使用的所有酶都配制成了Enzyme Mix的形式,使操作更加方便简单。
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■ 保存 |
-20℃。
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2X One Step TB Green RT-PCR Buffer 4 请于-20℃避光保存。 |
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■ 试剂盒特长 |
1. 进行Real Time One Step RT-PCR反应,可以快速、准确地对RNA病毒等微量RNA 进行分析。
2. PCR反应使用了高效的TaKaRa Ex Taq HS,可以进行Hot Start法PCR反应,再与Takara公司特别开发的Buffer系统相结合,具有高扩增效率,高扩增灵敏度之特点。2X One Step TB Green RT-PCR Buffer 4中预先混有TB Green等,反应用酶也配制成了Mix的形式,使反应液配制更加简单方便。 |
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■ 注意事项 |
1. 当同时需要进行数次Real Time One Step RT-PCR反应时,应先配制各种试剂的混合液,然后再分装到每个反应管中。这样,可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。
2. 使用PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 2时,应轻轻混匀,避免起泡;分取之前要小心地离心收集到反应管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。-20℃保存,使用后立即放回冰箱。
3. 2X One Step TB Green RT-PCR Buffer 4 融解后如有不溶物请充分混合,使用Vortex 等振荡完全溶解后使用。
4. 反应液的配制、分装请一定使用新的 (无污染的) 枪头、Microtube等,尽量避免污染。
5. 制品只能使用基因特异性反转录引物,不能使用Random Primer 和Oligo dT Primer 等进行反转录反应。
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