我们使用cookie改善您的浏览体验并提供有意义的内容。请阅读我们的cookie协议
收藏我们 在线订购

产品选择指南

技术服务信息

机构用户解决方案

当前位置:首页 > 人iPS细胞基因编辑解决方案 > 人iPS细胞基因编辑用产品

 
人iPS细胞基因编辑解决方案,Disease model in a dish
 
人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs) 具备多向分化潜能和自我更新能力,同时可保留细胞来源个体的遗传背景。结合CRISPR/Cas9基因编辑技术,可以打造肝脏、心脏、神经等多种疾病模型,进行遗传变异的功能性研究以及更深远的再生医学研究。
Takara提供多款工具,针对性解决人iPS细胞基因编辑关键操作和挑战。
 
关键操作之基因编辑人iPS细胞
 
CRISPR/Cas9基因编辑技术的两个组件(Cas9核酸酶和sgRNA)可以通过多种方法导入至靶细胞,如载体表达系统,RNA转染系统,或直接导入Cas9/sgRNA核糖核蛋白(RNP)复合物(Sander and Joung 2014)。与载体表达系统相比,直接导入Cas9/sgRNA RNPs更加快速,同时脱靶效应的可能性更小 (Kim et al. 2014)。
 
对于难转染的人iPS细胞,Takara提供两种Cas9/sgRNA RNPs导入方法,电穿孔Electroporation导入系统(632643)或者纳米囊泡Gesicle导入系统(632642),实现高效的、低脱靶效应的基因编辑。
 
 
Code No. Product Size
632643 Cellartis® iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System 1 Kit
632642 Cellartis® iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System 1 Kit
 
关键操作之获得所需突变的单细胞克隆
 
 
一旦Cas9/sgRNA RNP复合物被导入, 为了分离和筛选感兴趣的基因型,需要进一步分离成单细胞并扩增为单克隆。传统的人iPS 细胞以集落状生长和传代,不利于进行单细胞分离和单细胞培养,为基因编辑后建立单克隆增加了难度。
 
Takara旗下的DEF-CS 培养系统(Asplund et al. 2016),支持人多能干细胞无血清,无饲养层,单层均匀、非集落状生长,规避了集落状生长带来的挑战,允许单细胞传代和促进接种后的单细胞存活和扩增,更利于获得基因编辑后感兴趣突变的单克隆。建议使用Y30010进行人iPS细胞常规培养,使用Y30021进行人iPS细胞单克隆培养。
 
Code No. Product Size
Y30010 Cellartis® DEF-CS 500 Culture System 1 Kit
Y30021 Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit 1 Kit
 
参考文献:
· Asplund, A. et al. One Standardized Differentiation Procedure Robustly Generates Homogenous Hepatocyte Cultures Displaying Metabolic Diversity from a Large Panel of Human Pluripotent Stem Cells. Stem Cell Rev. Reports 12, 90–104 (2016).
· Kim, S., Kim, D., Cho, S. W., Kim, J. & Kim, J.-S. Highly efficient RNA-guided genome editing in human cells via delivery of purified Cas9 ribonucleoproteins. Genome Res. 24, 1012–9 (2014).
· Sander, J.-D. & Joung, J.-K. CRISPR-Cas9 systems for genomic editing, regulation and targeting. Nat. Biotechnol. 32, 347–55 (2014).
 
实验案例:
1. 在人iPS细胞的内源性基因插入AcGFP1标签
Tagging an endogenous gene with AcGFP1 in hiPS cells
 
 
2. 在人iPS细胞内源性基因插入myc标签
Tagging an endogenous gene with a myc tag in hiPS cells
 
3. 人iPS细胞敲除内源性基因CD81
Knocking out an endogenous gene (CD81) in hiPS cells
 
4. 在人iPS细胞内引入酪氨酸血症相关SNP
Introducing a tyrosinemia-related SNP in hiPS cells
 
5. 在人iPS细胞的AAVS1位点插入表达框
Inserting an expression cassette into the AAVS1 locus in hiPS cells
 
6. 使用电穿孔法编辑人iPS细胞
Editing hiPS cells using electroporation
 
7. 使用Gesicle技术编辑人iPS细胞
Editing hiPS cells using gesicle technology
 
8. 建立人iPS细胞的单细胞克隆
Single-cell cloning of hiPS cells

 
 
 

产品分类

人iPS细胞基因编辑用产品