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Takara mRNA合成解决方案(六)——高效加帽的IVT修饰酶
 
Takara Bio提供创新的技术、无与伦比的质量和灵活的设施,以支持mRNA生产工作流程的每个阶段——从基础研发到全面生产制造。
利用体外转录(In vitro transcription,IVT)从DNA模板合成RNA,下游应用能否成功依赖于DNA模板的设计、选择合适的方法,以及IVT流程中使用的关键产品。
我们提供全面的工具,方便您通过体外转录得到高产量的、适合多种下游应用的、高完整性的mRNA。
 
本次内容介绍IVT后对mRNA进行加帽、加尾的修饰酶
 
 
■ 转录后5’加帽
mRNA 5’端的帽结构对于真核生物mRNA的高效翻译、稳定和运输至关重要。5’ Cap是7号位甲基化的鸟苷(m7G) 。mRNA最初的5’ Cap结构 (m7G-ppp-N1) 称为Cap-0结构。对5’ Cap相邻的mRNA第一个核苷酸 (+1)甲基化进一步修饰,得到可以抑制免疫原性的Cap-1结构。

生成5’ Cap结构主要有两种方法:使用Cap类似物在IVT时进行共转录,或在合成mRNA后使用加帽酶进行加帽。
与共转录方法相比,IVT后进行mRNA修饰可增强灵活性、精确控制并降低复杂性,简化放大生产的难度,并确保了重现性。最常见的转录后修饰包括5’加帽和聚腺苷酸化 (poly (A) 加尾)。

加帽酶可以在未加帽的IVT mRNA上添加7-甲基鸟苷帽子结构,形成Cap-0形式的RNA 。通过2’-O-MTase进一步的修饰可以产生Cap-1结构。

Takara提供两种加帽酶:Vaccinia Capping Enzyme(Code No. 2460A)(简称VCE)和Faustovirus Capping Enzyme (S17) (Code No. 2480A)(简称FCE),以及从Cap0结构进一步修饰产生Cap-1结构的甲基化酶mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase (Code No. 2470A)
 
加帽酶和甲基化酶反应可以分两步进行反应,也可以在同一个反应管中一步法完成。
 
 
■ 转录后3'端加A尾

在IVT mRNA的3'端添加Poly(A)尾部可增强其在真核细胞中的稳定性、核输出和翻译效率。Poly(A)尾可以通过在DNA模板中设计多个连续的A、IVT反应后即可得到带A尾的mRNA,也可在IVT反应后使用Poly(A)聚合酶反应添加。

Takara的Poly(A) Polymerase(Code No. 2181)催化腺嘌呤残基掺入RNA的3'末端,利用单链RNA作为引物,可有效地添加Poly(A)尾。

 
■ 转录后修饰相关产品
*此优惠价仅限2025年9月1日-11月30日
 
Takara提供mRNA合成全面高效的解决方案,包括高产量、低dsRNA副产物的T7 RNA Polymerase,加帽效率在95%以上的mRNA加帽酶,环状RNA富集用酶RNase R,Poly(A)尾评估用酶RNase T1,用于IVT模板DNA构建的高稳定性感受态细胞,mRNA无细胞表达系统等,全线促销中,助力您的mRNA生产
 

页面更新:2025-10-21 14:15:31