| Takara mRNA合成解决方案（二）——RCA制备IVT模板DNA |
| Takara Bio提供创新的技术、无与伦比的质量和灵活的设施，以支持mRNA生产工作流程的每个阶段——从基础研发到全面生产制造。 利用体外转录（In vitro transcription，IVT）从DNA模板合成RNA，下游应用能否成功依赖于DNA模板的设计、选择合适的方法，以及IVT流程中使用的关键产品。 我们提供全面的工具，方便您通过体外转录得到高产量的、适合多种下游应用的、高完整性的mRNA。 |
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| ■ 方法 |
| · 使用phi29 DNA Polymerase (Code No. RR340A)，以5 ng环状FLuc BspQ I载体作为模板，在20 μl反应体系中，30℃下进行16小时的RCA反应。 · 引物有三种：①硫代磷酸修饰3’末端随机引物（Code No. 3807）、②经硫代磷酸修饰3’末端的特异性引物和③未修饰的特异性引物 · 反应后的产物经纯化后用BspQ I处理，分别以所得产物作为IVT模板，使用两种IVT Kit进行mRNA合成：①Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit (low dsRNA)（Code No. 6134）；②Takara IVTpro T7 mRNA Synthesis Kit（Code No. 6144）。同时，作为阳性对照，也以线性化的FLuc BspQ I模板质粒作为模板进行IVT反应。 · 对反应后的各样本进行mRNA产量测定和琼脂糖凝胶电泳。 |
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| 95℃ 5 min、冰上放置2 min ↓ 加入1 μl phi29 DNA Polymerase（10 U/μl） ↓ 30℃ 16 h ↓ 纯化 |
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| ◆ 结果表明，使用3种引物进行RCA得到的IVT模板，在产量和质量方面，都能获得与阳性对照线性化质粒相当的mRNA。 ◆ 在使用特异性引物时，phi29 DNA聚合酶的3'-5'核酸外切酶活性可能会降解引物，从而阻碍IVT模板的扩增。因此，推荐使用3' 末端经保护修饰的引物。 |
| Takara提供mRNA合成全面高效的解决方案，包括高产量、低dsRNA副产物的T7 RNA Polymerase，加帽效率在95%以上的mRNA加帽酶，环状RNA富集用酶RNase R，Poly(A)尾评估用酶RNase T1，用于IVT模板DNA构建的高稳定性感受态细胞，mRNA无细胞表达系统等，全线促销中，助力您的mRNA生产。 |
页面更新：2025-09-19 16:14:39
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