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“魔法剪刀”Dpn I,让定点突变事半功倍
 
在分子生物学和基因工程领域,限制性内切酶是不可或缺的工具,什么是限制性内切酶呢?简单来说,它就像是一把神奇的“分子剪刀”,能够识别特定的DNA序列,并在特定位置将DNA双链剪断。而Dpn I这把“剪刀”的独特之处就在于—它只对甲基化的特定DNA序列“下手”。因此凭借其独特的功能和高效的特异性,成为众多科研工作者的选择。
Q:
为什么选择Dpn I?

√ 精准识别,靶向清除。

专一识别并切割甲基化的DNA序列,轻松去除模板质粒,保留目标产物。


产品原理:

Dpn I仅切断腺嘌呤甲基化的GmATC序列,但不会切断非甲基化的GATC序列。大肠杆菌E.coli (dam+)菌株中提取的DNA会被甲基化,而体外合成的DNA 则不会被甲基化,因此Dpn I能够特异地识别切割甲基化的模板质粒,保留非甲基化的扩增产物。这样在克隆实验中,Dpn I可以特异性地切割原始模板质粒,以确保转入宿主细胞的主要为新合成的DNA。

识别位点如下:

 

 


Dpn I的典型应用


定点突变:
当我们想要对某个基因进行定点突变时,首先要设计含有突变位点的引物,然后通过PCR技术扩增含有突变位点的DNA片段。在这个过程中,新合成的DNA是没有被甲基化的,而原始的模板DNA是从大肠杆菌中提取出来的,带有甲基化修饰。将PCR产物加入含有Dpn I的反应体系中,接下来Dpn I将发挥它“魔法剪刀”的作用。由于Dpn I只切割甲基化的DNA,所以它会将原始的模板DNA进行切割,而我们想要的含有突变位点的新合成DNA将会保留下来,大大提高了后续实验的准确性和成功率。
 
以In-Fusion突变方法为例:
 


Takara-Dpn I产品优势:


在众多Dpn I产品中,Takara的Dpn I更是其中的佼佼者。1979年,Takara首次在日本销售限制性内切酶,开启了生物工程领域篇章。Takara凭借其研发历史悠久,多年一贯的高品质,被众人所熟知。
无论是常规限制酶还是QuickCut系列限制酶均通过高质检试验:
1) 过剩量酶反应检定
2) 基因组DNA分析
3) 连接-再切检定
4) pKF3克隆检测
5) Exonuclease Contamination Test
质控严格,确保无核酸酶污染,为实验结果的可靠性提供了坚实保障。
 
QuickCut系列限制酶还具有以下优势:
1. 反应速度更快,5-30 min即可完成反应。
2. 附带两种通用Buffer,酶切产物可直接电泳。
 
如果你正在从事基因相关工作,Takara的Dpn I绝对是你不可错过的科研好帮手。它将以精准、高效的特性,助力您顺利完成基因研究实验!
 


Takara定点突变实用产品推荐:


 
 

页面更新:2025-06-11 16:38:07