| 低价格高品质的TaKaRa Taq HS真实数据大公开！ | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 众多厂家选择TaKaRa Taq™ HS作为检测试剂的原料，是对其质量一致性、批间稳定性和良好性价比的肯定。看了下面的资料，相信您会对TaKaRa Taq HS的制品质量和稳定性有新的认识。 如果您有兴趣试用该产品，请随时和我们联系。如果您有意长期、批量购买该产品，我们欢迎并恭候您的垂询。 |
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| 联系邮箱：bulkorder@takarabiomed.com.cn | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| ———— Takara真实数据大曝光 ———— | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Takara公司的酶活测定方法：放射化学测定法（Radioactive Isotope，RI） | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| TaKaRa Taq HS活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为 1 个活性单位（U）； TaKaRa Taq HS酶活测定方法：RI法，通过测定H3标记dTTP的摄入量计算活性。该方法准确性高，特异性强。 |
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| · 其他公司酶活测定方法：荧光修饰法、功能测定法等，都需要使用标准对照品，属于相对活性测定，准确度低。 · 表中数据显示，不同公司的Taq HS，标签均为5 U/μl，但实测浓度偏高或偏低，每批产品的酶活性变化会很大。 |
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| TaKaRa Taq HS的酶活，采用权威的放射性活性测定法，准确性更高，从源头上保证了产品活性的真实性、稳定性、一致性 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 1）抗体封闭效率差异 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 结果说明 · 每Lot的封闭效率均在97%以上，说明抗体对TaKaRa Taq™ HS的封闭效果很好，可以有效减少非特异性扩增。 · 通常分子体外诊断Kit的CV要求是5%以内。TaKaRa Taq™ HS封闭效率的CV仅为0.53%，说明批间差非常小，稳定性高，可靠性高，更大程度降低了IVD Kit的研发、质控难度。 |
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| 不同批次的TaKaRa Taq™ HS，差异非常小，稳定性非常高。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 2）End Point PCR产物差异 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 结果说明 · 使用TaKaRa Taq HS扩增8 kb产物 ，10 Lot电泳结果基本相当；PicoGreen定量PCR产物，Lot间CV值仅为3.05%，说明Lot差非常小。 · 电泳结果及PicoGreen定量结果均显示TaKaRa Taq HS 优于A公司产品。 |
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| 3）qPCR结果差异 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 结果说明：进行qPCR时， · 不同浓度梯度下，TaKaRa Taq HS 10 Lot间Ct值的变异系数CV非常小，0.3%-0.9%之间 ，说明Lot差非常小，更大程度保证了IVD产品的CV值要求，为诊断企业研发、生产稳定的IVD产品提供了保障。 · TaKaRa Taq HS 的Ct值明显小于A公司产品，性能更优。 |
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| 1）Hot Start PCR的原理 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| Hot Start PCR法是提高PCR特异性的重要方法之一。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| master mix的配置阶段，PCR第一个循环前的升温阶段，容易产生引物二聚体 or 引物模板的错配。使用抗体修饰的PCR酶可以有效降低非特异扩增。 · 如果PCR酶没有和抗体结合，PCR酶的聚合酶活性会导致错配被扩增，也就是非特异性扩增，并且这个错误的PCR产物在后续PCR循环中会被不断放大。 · 如果PCR酶和抗体结合，PCR循环前，抗体抑制了聚合酶的活性，该阶段的错配不会被扩增。后续PCR循环时，抗体变性，聚合酶活性恢复，错配被打开，就不会产生大量错误的PCR产物。从而降低了非特异性扩增，提高目的DNA片段的扩增效率，降低了假阳性出现的概率。 |
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| 2）抗体对Taq酶的封闭效果 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 结果说明：进行qPCR时， · 各品牌酶浓度均表示为5 U/μl，但实测浓度相差很大。 · TaKaRa Taq HS，酶的活性定量准确，抗体封闭效率优良。 · B公司、C公司的封闭效率偏低，H公司、J公司的封闭效率非常低→产生非特异性扩增的可能性更高，影响目的产物的扩增。 · 部分公司酶的实测活性偏低或过高，说明酶活测定结果不准确，批间差大。 |
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| 1）Taq HS的Hot Start效果验证—评价方法 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 2）Taq HS的Hot Start效果验证—结果展示 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| · R001的全部结果都存在非特异性扩增，说明使用非HS型Taq酶时，非特异性扩增产生概率高于HS型PCR酶 · R007第1泳道的非特异性条带，在第2泳道时没有出现，说明R007的抗体，可以有效降低非特异性扩增 · R007第4泳道，没有出现非特异性扩增，说明master mix室温放置24 hr，抗体依然保持了HS作用，操作较慢或样本较多时，抗体依然保持了活性，对于IVD Kit研发，这是非常重要的优势。 |
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| 本文实验数据来自于Takara Biomedical Tech. Co., Ltd. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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页面更新：2024-06-17 11:52:43
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