| 96孔板做克隆？！我那惊人的实验搭子 |
| 自动化移液系统（Liquid handling systems）减少了人工操作中产生的错误和操作时间，并提高了产量及可重复性。分子克隆是得益于这类平台的基因工程技术之一，这类平台被广泛应用于高通量基因组装，如抗体发现、蛋白质组学和寡核苷酸/基因合成等研究领域。 对于高通量平台来说，基于PCR的无缝克隆由于其简便性、准确性和灵活性，优于其他传统的克隆方法（如酶切连接克隆或TA克隆）。然而，克隆试剂与特定移液系统的兼容性常常被忽视，而且实验流程并非总是适配的。 |
| 目前我们已和Beckman以及Eppendorf进行联用，通过在Beckman以及Eppendorf 平台上实现Takara Bio生物学研究试剂的自动化，研究人员将受益于简化的工作流程、短暂的手动操作时间和更高的可重复性，从而提高实验的准确性和效率。 |
| 让我们一起来看看具体的实验例吧！ |
| ♦ 平台 |
| Beckman Coulter Life Sciences Biomek i7 Dual Hybrid Workstation |
| ♦ 试剂 |
| Takara Bio In-Fusion Snap Assembly Master Mix |
| ♦ 应用 |
| Beckman使用96孔板进行自动化克隆反应 |
| ♦ 目的 |
| 将DNA 线性化片段 （3.7 kb）插入到Hind III酶切的pUC19线性化载体中 （2.7 kb）。 |
| ♦ 方法 |
| 目的序列通过PCR扩增，分别使用与线性化载体的5'和3'端同源的正向和反向引物。PCR产物纯化后，使用Biomek i7 Dual Hybrid工作站将In-Fusion Snap Assembly反应液分配到96孔板中。孵育后，克隆反应液被转化到感受态细胞中，并涂布在选择培养基上，以便进一步分析（图1）。 |
 |
| 图1 Biomek i7 Dual Hybrid工作站上的自动In-Fusion克隆工作流程示意图 |
| ♦ 结果 |
| Biomek i7 Dual Hybrid分注准确，通过测试5μL和10μL两种反应体积来验证In-Fusion克隆反应的菌落数量和克隆准确性。结果表明菌落数分别能达到700、800以上，且准确性能达到90%以上（图2）。 |
 |
| 图2 In-Fusion克隆反应的菌落数量和克隆准确性 |
| ♦ 平台 |
| Eppendorf epMotion® 5075t |
| ♦ 试剂 |
| Takara Bio In-Fusion Snap Assembly Master Mix |
| ♦ 应用 |
| Eppendorf使用 96 孔和384孔板进行自动化克隆反应 |
| ♦ 目的 |
| 将DNA 线性化片段 （3.7 kb）插入到Hind III酶切的pUC19线性化载体中 （2.7 kb）。 |
| ♦ 方法 |
| 使用epMotion® 5075t将In-Fusion Snap Assembly反应液分配到96或384孔板中。孵育后，克隆反应液被转化到感受态细胞中，并涂布在选择培养基上，以便进一步分析（图3）。 |
 |
| 图3 epMotion® 5075t工作站上的自动In-Fusion克隆工作流程示意图 |
| ♦ 结果 |
| Eppendorf分别对96孔和384孔板进行实验，epMotion可以同时处理5μL和 10μL的In-Fusion Snap Assembly的克隆程序，并成功分离移液和预混液。共得到40个阳性样本测序结果，该结果显示了>95%的克隆准确率，表明利用epMotion进行自动化液体处理，可以成功地进行In-Fusion无缝克隆，而且不会影响该克隆技术的高准确度。未克隆成功的菌落很少，且控制在非线性化载体的正常背景水平内（表1，图4）。 |
| 表1 不同移液方法和回收体积的菌落计数 |
 |
 |
| 图4 使用 epMotion 进行In-Fusion克隆反应设置。两种移液方法，分离式（标记为“Separate”）和预混合（标记为“Premix”）移液，使用 epMotion 建立 In-Fusion 反应。图形值是独立的克隆反应。误差线显示±标准偏差。准确性由Sanger测序确定。 |
| ♦ 结论 |
| 上述两个实验案例证明了In-Fusion无缝克隆可以与Biomek i7 Dual Hybrid工作站和Eppendorf epMotion 系统轻松适配，且不影响我们对这项技术所期望的高准确度和高效率。 |
| 具体优势如下： |
| · 可以让研究者提高克隆成功率 · 可以通过缩小克隆反应体积，来降低克隆试剂的前期成本 |
| 新的一年，In Fusion Snap Assembly（Code No. 638947/48/49）将以全新的价格，更高性价比面向大家，欢迎各位老师前来选购！ |
 |
| 订购方式： 1.可联系当地代理商 2. 登录Takara官网进行订购 |
| 点击图片可下载升级版无缝克隆试剂，了解产品实验流程及产品优势 |
 克隆产品选择指南 |
页面更新：2024-02-19 11:36:38
京公网安备 110114000405号