我们使用cookie改善您的浏览体验并提供有意义的内容。请阅读我们的cookie协议
收藏我们 在线订购 CoA查询
     

机构用户解决方案

产品选择指南

技术服务信息

当前位置:首页 > 新闻中心
无标题文档
如何快速确认基因编辑实验结果?
 
由于基因编辑是在微观的分子结构上对基因组进行定点改变,那么在完成基因编辑实验后怎样才可以快速 “见著知微” 地确认基因编辑实验结果呢?
Takara以下5款“黑科技”产品,我不希望还有人不知道!
 
1、基因编辑后突变检测
 
Code No. 产品名称 包装量
631448   Guide-it™ Mutation Detection Kit 25 Rxns
631443 100 Rxns
 
 
用途:确认CRISPR/Cas9等多种基因编辑方式所产生的基因突变。
 
产品特点
√ 直接以细胞为起始进行PCR扩增,可简便快速地检测出基因突变
√ 可用于检测多种基因编辑方式所产生的基因突变
√ ALL-IN-ONE型试剂盒,包含Guide-it Resolvase、Terra PCR Direct Polymerase和所有缓冲液
 
实验案例:Guide-it Mutation Detection Kit 与其他公司同类产品的比较
转染表达Cas9核酸酶的质粒和特异作用于AAVS1位点的sgRNA至293T细胞,转染48 hr后收集细胞,将其与未经转染的细胞按照不同比例进行混合,分别进行突变导入检测。采用Terra PCR Direct Polymerase Mix扩增含有AAVS1位点的目的片段并纯化其产物,之后分别采用Guide-it解离酶和Cel1酶(Surveyor assay)进行剪切。采用Guide-it解离酶剪切后条带清新易于识别,而Surveyor assay剪切后则显示明显的弥散,这样使得不容易测定突变效率并且低水平突变导入很难检测得到。
* 数据来源于Takara Bio USA, Inc.
 
2、基因编辑后基因敲入检测
 
Code No. 产品名称 包装量
632659   Guide-it™ Knockin Screening Kit 100 Rxns
632660 400 Rxns
 
用途:检测由同源重组所产生的基因组编辑、单核苷酸替换、鉴定识别含不同等位基因的杂合克隆。
 
产品特点
√ 无需测序,4小时可完成检测,快速确定是否发生了正确的基因敲入
√ 无需特殊仪器,使用荧光读板机或者定量PCR仪进行测定
√ 可用于批量或者单克隆细胞检测
√ SNP分析理想选择,双色检测可同时检测两个不同等位基因(SNP和WT等)
 
实验案例:鉴定iPSC基因编辑(SNP/WT)杂合克隆细胞系
Justin McDonough博士比较了Guide-it Knockin Screening Kit与Sanger测序在鉴定iPSC基因编辑(SNP/WT)杂合克隆细胞系实验的分析结果。
上图X轴为通过Sanger测序得到的基因分型(WT:野生型;SNP:HDR;Indel,NHEJ;unknown:未知)。同时使用Guide-it Knockin Screening Kit测定,检测出克隆细胞中携带的经编辑(SNP)和未经编辑(野生型WT)等位基因分别以蓝色(绿色荧光)和紫色(红色荧光)荧光信号强度表示。在大多数情况下,Knockin Screening Kit的分析结果与Sanger测序的分析结果是一致的(例如杂合克隆A07),但一些例子表明,使用常用的生物信息学分析工具会出现遗漏或者错误识别的情况。例如,像F04这样携带SNP的细胞克隆并没有通过Sanger测序数据的分析被识别出来(F04,上图中被定义为“unknown”)。此外,另一个携带所需SNP(E07)的克隆被错误地认为是在靶位点编码两个indel等位基因拷贝。研究人员表示,Knockin Screening Kit非常善于识别WT/SNP杂合克隆,这正是实验非常需要的。
 
3、基因编辑后高通量SNP筛选
 
Code No. 产品名称 包装量
632652   Guide-it™ SNP Screening Kit 100 Rxns
632653 400 Rxns
 
用途:快速检测基因编辑后细胞群中的单核苷酸替换、SNP基因分型。
 
产品特点
√ 高通量SNP筛选,无需测序,4小时即可快速完成
√ 可检测任意基因位点核苷酸替换
√ 无论是哪种合子型,都可以识别出基因编辑后的细胞克隆
 
实验案例:利用Guide-it SNP Screening Kit在多个人类基因组位点检测核苷酸替换
以野生型或者纯合型的基因组DNA(从Coriell研究所获取)为样品,使用Guide-it SNP Screening Kit分析标明碱基替换。结果显示,与野生型(橙色)和阴性对照(灰色)样品所产生的荧光信号相比,发生了碱基替换的纯合型(蓝色)样品产生了更强的荧光信号,表明实验成功检测到了基因组中所有碱基替换。
 
4、基因编辑后基因组序列确认
 
Code No. 产品名称 包装量
631444   Guide-it™ Indel Identification Kit 10 Rxns
 
用途:确认CRISPR/Cas9等多种方式基因编辑后产生的序列插入或序列缺失。
 
产品特点
√ 确认CRISPR/Cas9等多种方式基因编辑后导入的突变位点基因序列
√ 以细胞裂解液为起始的PCR与In-Fusion无缝定向基因克隆技术相结合,简便、快速且有效地获得目的克隆
√ ALL-IN-ONE型试剂盒,包含实验所需的目的基因扩增、克隆、制备测序用样品所需的全部试剂
 
实验案例:CRISPR/Cas9基因编辑后,确认CD81基因插入、缺失序列
转染表达Cas9和作用于CD81基因的sgRNA至HeLa细胞进行基因编辑,采用Guide-it Indel Identification Kit制备CD81基因靶位点测序用样品。选择6个克隆进行测序并将测序数据与野生型基因序列进行比对,确认CD81基因通过基因编辑导入的基因位点插入/缺失。
 
5、基因编辑后克隆基因型确认
 
Code No. 产品名称 包装量
632611   Guide-it™ Genotype Confirmation Kit 100 Rxns
 
用途:确认CRISPR/Cas9等多种方式基因编辑后单/双等位基因突变。
 
产品特点
√ 通过Cas9-sgRNA体外剪切实验确定单/双等位基因突变类型
√ 产品包括用于体外剪切实验的高纯度的重组Cas9核酸酶
√ 操作步骤流程化,可使用来自于细胞的目的基因组DNA直接扩增
 
实验案例:测定HEK 293细胞中的基因型
图A:使用Cas9和靶向C4BPB基因的sgRNA对HEK 293细胞进行基因编辑。使用Guide-it Genotype Confirmation Kit对已获得的15个单细胞克隆进行C4BPB位点的基因型鉴定。图中左侧的野生型 (WT),单等位基因 (M),双等位基因 (B)在分析中作为对照。结果表明,克隆1,4,10,12是野生型;克隆2是单等位基因突变;克隆3,5-9,11和13-15是双等位基因突变。
图B:对A图中挑选的克隆进行测序分析。每个结果中,小写字母代表的是野生型(WT)序列。对在A图中使用基因型鉴定方法确认结果为双等位基因突变的克隆,进一步测序分析表明克隆7是杂合子,克隆9和11是纯合子。在克隆2中,检测到3种不同的等位基因,可能是因为在HEK 293细胞系中出现拷贝数变异。
 
其他关联产品推荐
★ sgRNA的体外转录和筛选系统
可以被用来合成和检测sgRNAs效率。该试剂盒包含了体外转录和纯化sgRNAs,以及检测重组Cas9核酸酶对PCR靶向片段剪切效率,可用于CRISPR/Cas9 研究中sgRNA的制备、纯化和评价。
Code No. 产品名称 包装量
632636   Guide-it™ Complete sgRNA Screening System 50 Rxns
 
★ 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)/(10 μg/μl)
Takara有来源于野生型酿脓链球菌的重组Cas9蛋白质,助力基因编辑,锚定靶点切割!Guide-it Recombinant Cas9有多种蛋白质浓度产品,可满足电穿孔、显微注射等多种不同复合物导入方式。C末端的NLS核定位信号可以实现快速有效的突变导入,且经过不断的产品优化,已证实对哺乳动物细胞具有良好的耐受性,可降低导入哺乳动物细胞时所造成的细胞损伤,使脱靶效应更小化的同时,更容易实现高效率的基因编辑。
Code No. 产品名称 包装量
632640   Guide-it™ Recombinant Cas9 (3 μg/μl) 3 × 100 μg
632641 100 μg
632678   Guide-it™ Recombinant Cas9 (10 μg/μl) 200 μg
632679 500 μg
 
Takara Guide-it™产品线长期致力于基因编辑实验的解决方案!更多基因编辑相关资料欢迎您点击下载CRISPR/Cas9基因编辑完整解决方案宣传册,或直接观看在线讲座视频CRISPR/Cas9基因编辑全套操作和解决方案
 
 

页面更新:2023-02-08 14:01:34