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旧友新识—您真的了解Takara酵母转化试剂盒吗?
 
提到酵母转化实验,大家应该都有所了解,虽然它只是酵母相关实验中的小小一环,却对整个实验的成败与否起着至关重要的作用,不容忽视。

Takara有一款酵母转化试剂盒(Yeastmaker Yeast Transformation System 2),相信大家都不陌生,常被用来进行酵母双杂交实验,但您真的了解这款试剂盒吗?它的用途可不仅仅于此呢,只要您的实验涉及到酵母表达,它都可以帮您解决酵母转化相关的难题,现在,让我们一起来重新认识它吧。
 
制品信息:

酵母转化试剂盒:Yeastmaker Yeast Transformation System 2(630439)

本试剂盒采用聚乙二醇(PEG)/醋酸锂方法高效制备并转化酵母感受态菌株,适用于小规模或文库级别的高效酵母转化,转化效率为3 × 105转化子/μg质粒DNA。

 
制品特点:
1. 小规模或文库规模的高效转化方法
2. YPD Plus液体培养基提升了转化子的数量
3. 优化的Carrier DNA

两大优点,提高转化效率:
1. 采用“YPD Plus”复苏培养基,使更多的克隆子得以存活,为转化过程提供了更加高效、可靠的方法。
2. 优化的Yeastmaker Carrier DNA(鲑鱼精子DNA)有助于质粒DNA的吸收。
 
更多应用案例,助力每一次酵母转化实验:
1. 酵母双杂交系统,构建bait/prey蛋白质,用于研究蛋白质-蛋白质的相互作用。

Qu, Y., Wang, X., et al. (2021). ORF3a-Mediated Incomplete Autophagy Facilitates Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus-2 Replication. Frontiers in cell and developmental biology, 9, 716208.

通过筛选SARS-CoV-2(严重急性呼吸综合征冠状病毒-2,2019年冠状病毒病(新冠肺炎)大流行的病原体)的26种病毒蛋白,证明仅ORF3a的表达足以诱导不完全自噬。
以SARS-CoV-2 ORF3a作为诱饵蛋白质进行酵母双杂交筛选(使用Yeastmaker Yeast Transformation System 2将诱饵蛋白质转化至酵母菌株Y187),发现了 UVRAG与SARS-CoV-2 ORF3a的新的蛋白质-蛋白质相互作用,UVRAG是激活PI3KC3复合物以促进自噬体成熟并抑制人类结肠癌细胞增殖的关键自噬调节剂。通过SARS-CoV-2 ORF3a与自噬调节因子UVRAG相互作用,进一步研究ORF3a宿主自噬机制以及促进SARS-CoV-2复制的机制。

 
2. 重组酵母菌株,用于研究重组酵母菌株相关性能

Suzuki, T., Hoshino, T. et al.. (2019). High-temperature ethanol production by a series of recombinant xylose-fermenting Kluyveromyces marxianus strains. Enzyme and microbial technology, 129, 109359.

通过构建了两个重组马克思克鲁维菌株DMB5和DMB13,用于研究表达木糖还原酶(XR)、NAD+或蛋白质工程NADP+依赖性木糖醇脱氢酶(XDH)和木糖醇激酶(XK)。使用Yeastmaker Yeast Transformation System 2对质粒pGK406-XDHXKXR和pGK606-mXDHXXXR进行酵母转化,转化为马克思克鲁维酵母酵母DMB2-108,并稍加修改。用EcoRV消化基于pGK406的质粒(pGK406 XDHXXKXR和pGK406 mXDHXXR),然后用于转化到DMB2-108中,分别构建重组菌株DMB5和DMB13。质粒pGK406用EcoR V消化,然后转化到DMB2-108中以构建DMB4(对照菌株)。将这些菌株与先前报道的表达木糖发酵酵母(Scheffersomyces stipitis)XR和NAD+依赖性XDH以及酿酒酵母XK的菌株DMB3-7进行比较,以评估30°C和40°C下的酶活性和乙醇生产率。

 
3. 构建酵母载体,进行酵母表达研究
Thimmappa, R., Wang, S.,et al.. (2022). Biosynthesis of saponin defensive compounds in sea cucumbers. Nature chemical biology, 18(7), 774–781.
酿酒酵母是功能分析基因的模式生物,酵母系统已被广泛用于确认几种植物中脂肪酸去饱和酶的预测活性。将空pYES2载体转化的酵母细胞用作对照;酵母表达载体pYES2被用于独立克隆BnaFAD2-A5和BnaFAE1-A8基因,将两个构建体分别转化(使用Yeastmaker Yeast Transformation System 2)到酿酒酵母(INVSc1)中,并在酵母中表达它们以评估其功能。

Zafar, S., Tang, M. et al.. (2020). Candidate genes-association study to identify loci related to oleic acid in Brassica napus using SNP markers and their heterologous expression in yeast. Plant physiology and biochemistry : PPB, 146, 294–302.
通过整合DNA技术,将紫球海胆(S.purpuratus)LSS、仿刺参(A.japonicus)的OSC1a、OSC2a、OSC1b和OSC2b编码序列合成为gBlocks。然后在酵母中通过同源重组方式重组gBlocks以获得全长基因。在酵母菌株Gil77(gal2 hem3-6 erg7 ura3-167)中进行所有酵母同源重组和表达分析。使用引物通过PCR扩增gBlocks。然后将扩增的gBlocks与用Xba I和Hind III线性化的pYES2载体一起共转化为Gil77。使用Yeastmaker Yeast Transformation System 2进行酵母转化。转化使pYES2载体和gBlock OSC片段之间的体内重组,从而产生全长表达构建体。从酵母中回收质粒并转化到大肠杆菌(DH5α)中,通过测序验证其序列并进行后续酵母表达相关研究。
 
说了这么多,想必您对于Yeastmaker Yeast Transformation System 2这个“老朋友”已经有了一个新的认识,不论您是正在进行酵母杂交实验,还是其他酵母表达实验,都可以放心选择这位“老朋友”帮您解决难题哟!
 
 

页面更新:2023-01-10 09:25:59