术业有专攻, Takara蛋白质检测实用工具助您轻松应对Western Blotting实验! |
Western Blotting(蛋白质印迹法)是分子生物学中常用的一种实验方法。其基本原理是将蛋白质样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,转移到固相载体(例如纤维素薄膜)上,利用抗原抗体反应来检测目的蛋白质。Western Blotting一般操作流程如下: |
今天小编就来介绍一些Western Blotting相关的Takara蛋白质检测实用工具,帮助大家提高实验成功率! |
|
封闭试剂的选择:在这步实验操作中,为了防止蛋白质检测抗体非特异性与膜结合,对未结合蛋白质的膜区域进行封闭很重要。有时使用特定的一种封闭剂未必能达到预期效果,因此可以多准备几种封闭剂进行点杂交预实验,以确定合适的封闭剂。 常见的封闭试剂有脱脂奶粉、BSA,但这类封闭剂都含有哺乳动物来源成分,可能会与哺乳动物来源抗体产生非特异性交叉反应。Takara提供了两种不含哺乳动物来源成分的封闭剂,为您提供更多的封闭剂选择: |
① Western BLoT Blocking Buffer (Fish Gelatin) (Code No. T7131A),本产品使用鱼来源明胶作为封闭剂,同哺乳动物来源的奶粉和BSA相比,不会与哺乳动物来源抗体产生非特异性交叉反应,能够明确地检测出特异性抗原。由于是即用型试剂,无需稀释,因此既可直接用于封闭Western印迹膜;也可作为一抗、HRP或AP标记二抗的稀释液。 ② Western BLoT Blocking Buffer(Protein Free)(Code No. T7132A)是一款化学成分组成的封闭缓冲液,不含蛋白质,可以很好地抑制非特异性信号,能够有效地用于检测磷酸化蛋白质。这款同样也是即用型试剂。 |
抗体剥离试剂(Stripping Buffer):Stripping Buffer是指能从膜上去除一抗和二抗,但不影响膜上结合的待测蛋白质的试剂。由于目的蛋白质的浓度和使用的抗体浓度不同,胶片曝光条件也不同,因此使用这款比较有特点的抗体剥离试剂可以有效去除膜上的抗体,帮助大家反复摸索实验条件,节省抗体。 Western BLoT Stripping Buffer (Code No. T7135A),使用本试剂能在室温下从膜上将一抗、二抗和检测试剂去除,之后可在同一膜上进行目的蛋白质和其他蛋白质的再次检测,可以帮助您重新研讨和优化实验条件。 |
抗原抗体反应促进剂:可以显著提高检测灵敏度,即使仅有少量抗体也可以有效进行抗体反应,提升检测信号强度。 ① Western BLoT Immuno Booster (Code No. T7111A)适用于包括Western Blotting和ELISA在内的各种免疫检测,可提高最终的检测灵敏度(从数倍到数十倍)。 ② Western BLoT Immuno Booster PF (Code No. T7115A)不含蛋白质,可与Western BLoT Blocking Buffer(Protein Free)(Code No. T7132A)联用,在不含外源蛋白质的体系下进行检测和分析。 |
蛋白质定量试剂的选择:为了保持不同样品的上样量一致,以便于后续结果分析,通常会在WB之前对蛋白质样品进行定量处理。常用的蛋白质定量方法有BCA法和Bradford法(考马斯亮蓝法),Takara准备了对应的蛋白质定量试剂。 ① TaKaRa BCA Protein Assay Kit (Code No. T9300A)针对不同种类蛋白质,测定值变动小。可在20-2,000 μg/ml浓度范围内,蛋白质浓度与吸光度值成线性关系,受到表面活性剂的影响也较小。 ② TaKaRa Bradford Protein Assay Kit (Code No. T9310A)操作简单迅速,可在1-1,000 μg/ml浓度范围内进行蛋白质定量,并且不受还原剂的影响。 |
点击下方图片下载Western Blotting实验操作指南 |
页面更新:2022-10-31 15:53:27