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Takara来支招,如何确定慢病毒/逆转录病毒前病毒整合位点!
 
慢病毒和逆转录病毒载体在生命科学研究领域,作为向目标细胞导入外源基因的有力工具而得到广泛应用。通过它们的复制生命周期会将慢病毒和逆转录病毒RNA基因组的一个DNA拷贝整合到宿主基因组中。利用这一特点,可以实现外源基因在目标细胞中的持续稳定表达。
 
而整合位点位置对转基因的表达和宿主细胞的表现型都有重要影响,甚至可能会导致关键基因突变或者激活原癌基因,进而导致发生恶性肿瘤的风险增加。在2021年2月国家发布试行的《基因修饰细胞治疗产品非临床研究与评价技术指导原则》中,描述了基于临床安全性考虑需要对一些整合性载体,包括如慢病毒、逆转录病毒,所可能带来的插入突变风险进行评估。
 
成熟的整合位点分析技术。
Takara可分别提供适用于慢病毒和逆转录病毒前病毒整合位点分析试剂盒,使用基因组步移技术获取慢病毒/逆转录病毒前病毒在转导细胞基因组中的整合位点片段,后续对扩增产物进行测序和分析,可以确认整合位点所处的染色体位置。
 
产品名称 Code No. 适用病毒类型
Lenti-X Integration Site Analysis Kit 631263 慢病毒
Retro-X Integration Site Analysis Kit 631467 逆转录病毒
 
我们来看一下HT1080细胞克隆中慢病毒整合位点的分析结果。
提取慢病毒整合后的HT1080细胞基因组DNA,使用DraI、SspI、HpaI这3种不同的平末端切割限制酶酶切消化基因组DNA并连接接头,构建出3个病毒整合文库。这3个病毒整合文库经过两轮PCR扩增后,对获得的5个扩增产物进行纯化,并分别使用试剂盒中包含的AP2和LSP2接头引物测序和BLAST软件分析。分析结果显示,其中4个PCR产物对应的整合位点为染色体12q22。染色体12q22上的病毒整合位点位于NR2C1基因的内含子内。
 
了解详情:
Lenti-X Integration Site Analysis Kit
Retro-X Integration Site Analysis Kit
 

 
T细胞治疗研究解决方案
Takara可以为T细胞改造培养提供较为完善的解决方案,助力T细胞治疗研究。
 
增强慢病毒转导,促进增殖
RetroNectin GMP级试剂
慢病毒4小时滴度测定
Lenti-X p24 Rapid Titer Kit
人细胞因子10分钟定量
IFN-γ/IL-2/TNF-α GoStix Plus
 
 

页面更新:2021-07-30 10:01:47