#大型答疑现场# 二十二问Takara人iPS-肝分化系统

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#大型答疑现场# 二十二问Takara人iPS-肝分化系统！

Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）提供了一个完整的、用户友好的解决方案，可以实现在三周内获得功能性的人iPS来源肝细胞，这些分化获得的人iPS-肝细胞表达充足的药物代谢酶和转运蛋白，在长时间的培养过程中表现稳定的功能特性，因此，可以替代原代肝细胞，作为新型的肝细胞模型来开展肝脏疾病研究和药物代谢开发。另外，不同人iPS来源肝细胞，也可以更好的反映人类群体中的代谢多样性。

Code No.	产品名称	包装量
Y30055	Cellartis^®iPS Cell to Hepatocyte Differentiation Systemt	1 Kit

开讲啦！

Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）介绍视频，六分钟，知其然！

答疑时间到！

Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）常见问题集，二十二问，知其所以然！

1. Cellartis^® iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055) 与Cellartis^® Definitive Endoderm Differentiation Kit with DEF-CS Culture System(Y30035) 和Cellartis^® Hepatocyte Differentiation Kit (Y30050) 有什么不同？

Y30055=Y30035+Y30050，具体组分没有区别，请按照实际需求整套或单独购买。

2. 什么样的多能干细胞可以作为肝分化起始？

Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）被证明对20多株多能干细胞均有效（参考以下文献Asplund et al. 2016），Takara提供即用的人iPS细胞系，您也可以使用自己制备的多能干细胞作为分化起始。

Asplund, A. et al. One standardized differentiation procedure robustly generates homogenous hepatocyte cultures displaying metabolic diversity from a large panel of human pluripotent stem cells. Stem Cell Rev. 12, 90-104 (2016).

3. 是否需要单独购买DEF-CS培养系统?

Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）包括DEF-CS 100 Culture System，即100 ml，足够肝分化起始人iPS细胞的增殖和驯化。如需大量扩增培养，可选择DEF-CS 500 Culture System（Y30010），为 500 ml。

4. 人iPS分化获得的DE细胞纯度为多少？最终分化获得的干细胞纯度为多少?

分化至第7天的DE细胞Sox-17平均阳性率为97%。分化至21天及之后的肝细胞HNF4α平均阳性率为94%。

5. 剩余6%的HNF4α阴性的细胞属于什么类型?

这些细胞亚群很有可能是内胚层细胞的混合物，确切的组成尚不清楚。

6. Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）可以用于其他种属多能干细胞分化吗?

Takara内部未做过其他种属多能干细胞的分化验证。

7. 分化至32天后人iPS-肝细胞会怎么样？会失去细胞活力，不再保持肝细胞特性还是死亡?

Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）支持人iPS-肝细胞维持培养至32天，额外使用Cellartis Hepatocyte Maintenance Medium(Y30051)可以继续维持培养10天，即至４２天，随后肝细胞将丧失活力，不再贴壁，出现凋亡。

8. Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）获得的人iPS-肝细胞与人原代肝细胞相比如何?

主要的区别是人原代肝脏细胞功能特性在培养中会迅速下降损失，然而Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）获得的人iPS-肝细胞可以维持功能特性数周，并且这些分化获得的人iPS-肝细胞具备白蛋白分泌、LDL摄取等很多关键的肝细胞功能特性，与原代肝细胞功能相似，更多数据信息详见以下技术资料。

Next-generation human iPS cell-derived hepatocytes for metabolic disease modeling

此外，由于人类群体中显著的代谢多样性，不同批次的原代肝细胞显示出大的差异性。因此，在使用原代肝细胞的实验或研究中，当迫于供体材料有限等原因转向其他新的批次的时候，研究者不得不考虑供体差异性的问题。而人iPS-肝细胞通过对同一供体来源的人iPS细胞持续定向分化，可以实现对同一供体背景的肝细胞的稳定供应。

9. 分化至第几天可以作为肝细胞开始使用?

通常分化至21天的细胞被认为是肝细胞可以开始使用。然而，21天后的肝细胞继续成熟，如胎儿标志物AFP在21天-39天逐步下调，因此，最佳的使用日期取决于具体的应用和对肝细胞成熟的要求。

10. 使用Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）获得的人iPS-肝细胞有什么功能特点?

Cellartis Enhanced hiPS-HEP v2 cells是同样使用Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）获得的肝细胞产品，因此可以参考相关数据，如包括表达预期的标志物和呈现成熟肝细胞的功能特征；显示功能性的葡萄糖调节和正常的胰岛素反应；显示功能性的脂质代谢；表达药物代谢机制（CYP酶、II相酶、转运蛋白等）。注意，不同供体来源肝细胞如预期显示不同的CYP活性谱，更多数据信息详见以下技术资料。

Next-generation human iPS cell-derived hepatocytes for metabolic disease modeling

Next-generation human iPS cell-derived hepatocytes for long-term drug metabolism studies

11. 一个Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）可以获得多少肝细胞?

大约5 x 10⁶ 肝细胞，相当于50 cm² 汇合的肝细胞，换言之，96孔板的150个孔或24孔板的全部24个孔。

12. 使用Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）获得的人iPS-肝细胞是否表达成人肝细胞标志物?

是的，分化获得的人iPS-肝细胞表达白蛋白、PXR、CYP1A3、CYP2C9和CYP3A4等成人肝细胞标志物。

13. CYP酶活性如何测定?

使用液相色谱/质谱对形成的特定代谢物测定，如代谢物acetaminophen (对应CYP1A), 4-OH-Diclofenac (对应CYP2C9), OH-Bufuralol (对应CYP2D6) 和1-OH-Midazolam (对应CYP3A)，Protocol详见以下技术资料。

A simple and complete system to generate mature hepatocytes from various iPS cell sources

14. 使用Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）获得的人iPS-肝细胞是否具有药物代谢活性?

是的, 分化获得的人iPS-肝细胞表达基础水平的CYP酶活性，如CYP1A，CYP3A，CYP2C09和 CYP2C19等。

15. 使用Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）获得的人iPS-肝细胞是否显示胆小管的形成?

Takara内部未观察到，但是有客户反馈观察到了胆小管的形成。

16. 使用Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）获得的人iPS-肝细胞中CYP酶活性能否被诱导?

分化获得的人iPS-肝细胞显示几种重要的CYP酶活性表达为基础水平，然而，只观察到较低水平的CYP诱导。

17. 分化获得的人iPS-DE细胞可以扩增培养吗?

DE细胞应该具备增殖能力，以下文献Hannan et al. 2013中提供了多能干细胞向前肠DE细胞分化的Protocol和后续DE细胞增殖培养的Protocol。Takara并未使用文献中的Protocol培养测试我们的DE细胞，也没有维持或扩增DE细胞的培养基。

Hannan, N. R. F. et al. Generation of Multipotent Foregut Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells. Stem Cell Reports 1, 293-306 (2013).

18. 分化获得的人iPS-DE细胞可以分离并重新接种吗?

是的，DE细胞在肝分化前需要分离并重新接种铺板。

19. 分化获得的人iPS-DE细胞可以分离并冻存吗?

是的，我们提供DE细胞的冻存Protocol。

20. 分化获得的人iPS-肝细胞可以扩增培养吗?

不能，肝细胞是终端分化细胞，无法增殖。

21. Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）适合使用什么规格的培养容器?

人iPS-DE分化，培养瓶是最合适的，最小可以使用6孔板。DE-肝分化，推荐24孔板和96孔板，更大的容器如培养瓶也可以使用。

22. Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）可以进行3D分化吗?

不能，只适用于2D分化。

页面更新：2022-09-01 13:42:27

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