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#大型答疑现场# 二十二问Takara人iPS-肝分化系统!
 
Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)提供了一个完整的、用户友好的解决方案,可以实现在三周内获得功能性的人iPS来源肝细胞,这些分化获得的人iPS-肝细胞表达充足的药物代谢酶和转运蛋白,在长时间的培养过程中表现稳定的功能特性,因此,可以替代原代肝细胞,作为新型的肝细胞模型来开展肝脏疾病研究和药物代谢开发。另外,不同人iPS来源肝细胞,也可以更好的反映人类群体中的代谢多样性
 
Code No. 产品名称 包装量
Y30055 Cellartis® iPS Cell to Hepatocyte Differentiation Systemt 1 Kit
 
开讲啦!
Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)介绍视频,六分钟,知其然!
 
答疑时间到!
Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)常见问题集,二十二问,知其所以然!
 
1. Cellartis® iPS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055)Cellartis® Definitive Endoderm Differentiation Kit with DEF-CS Culture System(Y30035)Cellartis® Hepatocyte Differentiation Kit (Y30050) 有什么不同?
Y30055=Y30035+Y30050,具体组分没有区别,请按照实际需求整套或单独购买。
 
2. 什么样的多能干细胞可以作为肝分化起始?
Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)被证明对20多株多能干细胞均有效(参考以下文献Asplund et al. 2016),Takara提供即用的人iPS细胞系,您也可以使用自己制备的多能干细胞作为分化起始。
 
Asplund, A. et al. One standardized differentiation procedure robustly generates homogenous hepatocyte cultures displaying metabolic diversity from a large panel of human pluripotent stem cells. Stem Cell Rev12, 90-104 (2016).
 
3. 是否需要单独购买DEF-CS培养系统?
Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)包括DEF-CS 100 Culture System,即100 ml,足够肝分化起始人iPS细胞的增殖和驯化。如需大量扩增培养,可选择DEF-CS 500 Culture System(Y30010),为 500 ml。
 
4. 人iPS分化获得的DE细胞纯度为多少?最终分化获得的干细胞纯度为多少?
分化至第7天的DE细胞Sox-17平均阳性率为97%。分化至21天及之后的肝细胞HNF4α平均阳性率为94%。
 
5. 剩余6%的HNF4α阴性的细胞属于什么类型?
这些细胞亚群很有可能是内胚层细胞的混合物,确切的组成尚不清楚。
 
6. Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)可以用于其他种属多能干细胞分化吗?
Takara内部未做过其他种属多能干细胞的分化验证。
 
7. 分化至32天后人iPS-肝细胞会怎么样?会失去细胞活力,不再保持肝细胞特性还是死亡?
Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)支持人iPS-肝细胞维持培养至32天,额外使用Cellartis Hepatocyte Maintenance Medium(Y30051)可以继续维持培养10天,即至42天,随后肝细胞将丧失活力,不再贴壁,出现凋亡。
 
8. Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)获得的人iPS-肝细胞与人原代肝细胞相比如何?
主要的区别是人原代肝脏细胞功能特性在培养中会迅速下降损失,然而Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)获得的人iPS-肝细胞可以维持功能特性数周,并且这些分化获得的人iPS-肝细胞具备白蛋白分泌、LDL摄取等很多关键的肝细胞功能特性,与原代肝细胞功能相似,更多数据信息详见以下技术资料
 
Next-generation human iPS cell-derived hepatocytes for metabolic disease modeling
 
此外,由于人类群体中显著的代谢多样性,不同批次的原代肝细胞显示出大的差异性。因此,在使用原代肝细胞的实验或研究中,当迫于供体材料有限等原因转向其他新的批次的时候,研究者不得不考虑供体差异性的问题。而人iPS-肝细胞通过对同一供体来源的人iPS细胞持续定向分化,可以实现对同一供体背景的肝细胞的稳定供应。
 
9. 分化至第几天可以作为肝细胞开始使用?
通常分化至21天的细胞被认为是肝细胞可以开始使用。然而,21天后的肝细胞继续成熟,如胎儿标志物AFP在21天-39天逐步下调,因此,最佳的使用日期取决于具体的应用和对肝细胞成熟的要求。
 
10. 使用Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)获得的人iPS-肝细胞有什么功能特点?
Cellartis Enhanced hiPS-HEP v2 cells是同样使用Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)获得的肝细胞产品,因此可以参考相关数据,如包括表达预期的标志物和呈现成熟肝细胞的功能特征;显示功能性的葡萄糖调节和正常的胰岛素反应;显示功能性的脂质代谢;表达药物代谢机制(CYP酶、II相酶、转运蛋白等)。注意,不同供体来源肝细胞如预期显示不同的CYP活性谱,更多数据信息详见以下技术资料
 
Next-generation human iPS cell-derived hepatocytes for metabolic disease modeling
Next-generation human iPS cell-derived hepatocytes for long-term drug metabolism studies
 
11. 一个Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)可以获得多少肝细胞?
大约5 x 106 肝细胞,相当于50 cm2 汇合的肝细胞,换言之,96孔板的150个孔或24孔板的全部24个孔。
 
12. 使用Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)获得的人iPS-肝细胞是否表达成人肝细胞标志物?
是的,分化获得的人iPS-肝细胞表达白蛋白、PXR、CYP1A3、CYP2C9和CYP3A4等成人肝细胞标志物。
 
13. CYP酶活性如何测定?
使用液相色谱/质谱对形成的特定代谢物测定,如代谢物acetaminophen (对应CYP1A), 4-OH-Diclofenac (对应CYP2C9), OH-Bufuralol (对应CYP2D6) 和1-OH-Midazolam (对应CYP3A),Protocol详见以下技术资料
 
A simple and complete system to generate mature hepatocytes from various iPS cell sources
 
14. 使用Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)获得的人iPS-肝细胞是否具有药物代谢活性?
是的, 分化获得的人iPS-肝细胞表达基础水平的CYP酶活性,如CYP1A,CYP3A,CYP2C09和 CYP2C19等。
 
15. 使用Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)获得的人iPS-肝细胞是否显示胆小管的形成?
Takara内部未观察到,但是有客户反馈观察到了胆小管的形成。
 
16. 使用Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)获得的人iPS-肝细胞中CYP酶活性能否被诱导?
分化获得的人iPS-肝细胞显示几种重要的CYP酶活性表达为基础水平,然而,只观察到较低水平的CYP诱导。
 
17. 分化获得的人iPS-DE细胞可以扩增培养吗?
DE细胞应该具备增殖能力,以下文献Hannan et al. 2013中提供了多能干细胞向前肠DE细胞分化的Protocol和后续DE细胞增殖培养的Protocol。Takara并未使用文献中的Protocol培养测试我们的DE细胞,也没有维持或扩增DE细胞的培养基。
 
Hannan, N. R. F. et al. Generation of Multipotent Foregut Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells. Stem Cell Reports 1, 293-306 (2013).
 
18. 分化获得的人iPS-DE细胞可以分离并重新接种吗?
是的,DE细胞在肝分化前需要分离并重新接种铺板。
 
19. 分化获得的人iPS-DE细胞可以分离并冻存吗?
是的,我们提供DE细胞的冻存Protocol。
 
20. 分化获得的人iPS-肝细胞可以扩增培养吗?
不能,肝细胞是终端分化细胞,无法增殖。
 
21. Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)适合使用什么规格的培养容器?
人iPS-DE分化,培养瓶是最合适的,最小可以使用6孔板。DE-肝分化,推荐24孔板和96孔板,更大的容器如培养瓶也可以使用。
 
22. Takara人iPS-肝分化系统(Y30055)可以进行3D分化吗?
不能,只适用于2D分化。
 
 
 
 
 

页面更新:2022-09-01 13:42:27