无需RNA纯化，生物样本直接qPCR—新冠病毒检测

机构用户解决方案

产品选择指南

一般PCR相关制品

PCR Enzyme的选择 PCR原理说明高成功率PCR优选酶：TaKaRa Ex Premier 高保真酶：PrimeSTAR系列基本PCR：Taq、Ex Taq、LA Taq系列无需提取的直接PCR：MightyAmp系列菌落PCR、预混染料的PCR酶特殊用途：多重PCR，防污染等高端PCR酶（Clontech） DNA PCR相关制品 RT-PCR试剂盒具备反转录活性的PCR酶：TaKaRa Tth PCR仪器
等温扩增相关制品

等温扩增酶
定量PCR相关制品

qPCR套装 qPCR学习中心反转录反应（qPCR专用）反转录反应试剂(Clontech) 嵌合荧光法检测(Takara) 嵌合荧光法检测(Clontech) miRNA 嵌合荧光法检测探针检测 Cycleave探针检测 qPCR－仪器 qPCR Primer qPCR－RNA/DNA的制备
cDNA合成 & 克隆

克隆学习中心 DNA Ligation TA克隆和平滑末端克隆 In-Fusion无缝克隆 cDNA合成&文库构建 SMART全长cDNA合成&文库构建 Random Mutagenesis Site-Directed Mutagenesis 基因组DNA序列调取试剂盒 Vector（克隆用）感受态细胞修饰酶/Ligases 修饰酶/磷酸酶、激酶修饰酶/DNA & RNA Polymerase 修饰酶/焦磷酸酶修饰酶/RTase、RNase Inhibitor 修饰酶/核酸酶、拓扑异构酶 Nucleotide Buffer（Powder）etc. 用于mRNA生产的酶（HQ级） Others（基因工程相关制品）
NGS相关制品

NGS 学习中心单细胞 RNA-Seq 单细胞 DNA-Seq RNA-Seq DNA-Seq 生殖健康表观遗传学分析免疫库分析单细胞分选系统 NGS关联制品 PCR酶（NGS用）
自动化系统

自动化学习中心单细胞分选系统Shasta及其应用高通量单细胞分选系统ICELL8 cx 及其应用高通量Real-Time PCR系统高通量单细胞分选系统ICELL8应用
核酸提取、纯化及DNA标记

DNA片段、质粒DNA纯化基因组DNA纯化试剂(柱式法) 基因组DNA纯化试剂(试剂型) RNA提取、纯化试剂(柱式法) RNA提取、纯化试剂(试剂型) RNA保存试剂 Small RNA提取试剂体液样品exosome提取试剂病毒核酸纯化试剂盒酵母核酸纯化试剂盒核酸提取及纯化制品-Others DNA标记标记DNA-蛋白质的回收
限制酶

限制酶基本信息常规限制酶系列产品 QuickCut限制酶 RNA限制酶
电泳相关制品

核酸染料 DNA Markers RNA Markers 蛋白质Markers Agarose Loading Buffer 常用缓冲液方便装电泳相关装置
蛋白质互作研究（酵母杂交系统）

Takara酵母杂交学习中心 Matchmaker^® Gold酵母双杂系统 Matchmaker^® Gold酵母单杂系统互作的确认和评价 Matchmaker相关制品
表达调节及蛋白质性能分析

iDimerize^™蛋白质互作诱导系统 ProteoTuner^™蛋白质调节系统 Tet诱导表达系统
蛋白质表达相关制品

E.coli蛋白质表达 Brevibacillus/Bacillus蛋白质表达哺乳动物细胞蛋白质表达昆虫细胞蛋白质合成(Clontech) 无细胞蛋白质合成系统 Protein Refolding
蛋白质纯化、分析和检测

Capturem新型膜技术应用蛋白质样品制备 His标签融合蛋白质纯化 GST标签融合蛋白质纯化生物素标签融合蛋白质纯化 DYKDDDDK标签融合蛋白质纯化 Myc标签融合蛋白质纯化抗体纯化蛋白质IP&Co-IP 糖/磷酸化蛋白质纯化蛋白质检测蛋白质电泳胶染色蛋白质定量蛋白酶（His标签去除）蛋白酶（氨基酸序列分析）
基因导入（Virus、Vectors）

病毒基因传递系统选择向导重组慢病毒(Lentivirus)制品重组逆转录病毒(Retrovirus)制品重组腺相关病毒(AAV)制品重组腺病毒(Adenovirus)制品哺乳动物细胞用载体酵母、丝状真菌用载体植物用载体
转染试剂

Xfect转染试剂选择向导质粒转染试剂 RNA转染试剂 Protein转染试剂
干细胞研究相关制品

干细胞学习中心干细胞基因操作 (Cell reprogramming) 细胞 (Cell) 细胞培养产品 (Cell culture) 抗体 (Antibodies) 分化试剂盒和多能性监测 (Pluripotency and Differentiation )
表观遗传学相关制品

甲基化DNA富集相关制品 PCR/qPCR相关制品 Control Genome DNA 甲基化DNA相关酶制品亚硫酸氢盐处理相关制品
基因组编辑相关制品

CRISPR/Cas9 Cre重组酶基因敲入用长单链DNA制备
荧光蛋白质 & 报告系统

荧光蛋白质按颜色、名称分类荧光蛋白质按用途分类荧光蛋白质相关制品报告系统
抗体 & ELISA & 细胞信号转导

细胞增殖、细胞毒性测定细胞凋亡（Takara）细胞凋亡（Clontech） EIA试剂盒（Takara）免疫染色关联制品细胞信号转导（Clontech）酶活性测定试剂盒脂肪细胞、骨细胞分化试剂抗体（Takara）
细胞 & 培养相关制品

细胞培养相关制品细胞生物学检测试剂细胞解冻仪器
microRNA & RNAi研究相关制品

RNA合成提取及纯化制品 microRNA定量PCR miRNA表达 Small RNA克隆 shRNA表达检测合成siRNA定量 RNAi相关制品
Library & cDNA & RNA

Human cDNA libraries series Mouse cDNA libraries series Rat cDNA libraries series cDNA、Genome DNA Total RNA & Poly A⁺ RNA
糖工学相关制品

糖工学酶糖工学试剂盒 Glycosphingolipid解析试剂
应用检测（食品-环境-人）

活菌DNA检测相关制品防污染相关制品食物中毒检测（PCR）食物中毒检测 (Real Time PCR) 食物中毒检测 (按Target选择) 肉种鉴定相关制品水质检测人感染症检测菌种鉴定支原体检测
仪器相关制品

PCR仪器支持中心 Q-PCR仪 E-PCR仪电泳仪器产品
Clontech相关组分信息表

Clontech相关组分信息表

技术服务信息

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无需RNA纯化，生物样本直接qPCR—新冠病毒检测

2019年，Takara发布了无需RNA提取，可直接使用生物样本进行定量PCR的新产品PrimeDirect^™ Probe RT-qPCR Mix (or with UNG)（Code No.RR650/651）。该技术不仅引起了分子生物试剂行业的关注，更为大量IVD客户、医药研究人员等带来了简便、快速的体验。尤其在新冠肺炎疫情下，无需RNA提取即可进行新冠病毒核酸检测，可以大大缓解人力、时间等压力。

Takara和各国研究人员已经使用PrimeDirect^™ Probe RT-qPCR Mix对各种样本进行了直接qPCR的实验，成功的检测结果让您可以有充足的信心告别繁琐的RNA提取，进入快速、直接qPCR新时代。

实验例新冠病毒的直接qPCR检测

Lübke等科学家在《Journal of Clinical Virology》发表了题为《Extraction-free SARS-CoV-2 detection by rapid RT-qPCR universal for all primary respiratory materials》的文献，文章中作者以PrimeDirect^™ Probe RT-qPCR Mix（Code No.RR650）为基础，研发了无需RNA提取、直接进行新冠病毒qPCR检测的方法。

下面简要介绍文章中的反应体系和操作流程，实际应用时可能需要用户进行优化。

样本收集

为了保持反应灵敏度，样品在4℃下冷冻或储存时间不得超过7天。本方案适用于所有主要呼吸样本。

1. 使用Remel Sputasol (Thermo Fisher Scientific)对粘性样本进行预处理。
2. 将50 μl样本在99℃下加热灭活5分钟。
3. 加热的样本4000 rpm离心5分钟。
4. 向以下反应混合物中添加5 μl上清液。

反应体系

可以先配制不含样本的反应试剂master mix，分装为20 μl/rxn，冷冻保存，在一周内使用。

组分	液量（μl）
PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix (2X)	12.5 μl
Forward Primer	终浓度400 nM
Reverse Primer	终浓度400 nM
qPCR probe	终浓度200 nM
Viral PBS sample	5 μl
RNase Free H2O	Fill to 25 μl
Total	25 μl

新冠病毒检测用引物和探针，使用乙型肝炎S抗原基因作为内对照

Name	目的基因	序列	反应液终浓度
CoV-E-F	E gene	CTTTTTCTTGCTTTCGTGGTATTCT	400 nM
CoV-E-R	E gene	TACAAGACTCACGTTAACAATATTGCA	400 nM
CoV-E-Pr	E gene	FAM-CTAGCCATCCTTACTGCGCTTCGATTGTG-BHQ	200 nM
HBV-Taq1	HBV-SynQ*	CAACCTCCAATCACTCACCAAC	200 nM
HBV-Taq2	HBV-SynQ*	ATATGATAAAACGCGCAGACAC	200 nM
HBV-IC	HBV-SynQ*	Cy5-CTGCCGAGCTCTGACTA-BHQ	200 nM

*HBV-SynQ (internal control): 合成的质粒，编码失活的乙型肝炎S抗原。

反应条件

90℃	30 sec	变性（粗提·核酸纯化）
60℃	5 min	反转录
PCR循环圈数: 45
95℃	5 sec	变性
60℃	30 sec	退火/延伸

结论

作者使用上述方法，对于常规方法Ct值＜35的样本的直接qPCR检出率为95.8%，对于全部样本（Ct值较高、保存时间较长）的直接qPCR检出率为81.3%。
该方法具有灵活、快速的特点，可在一个小时内完成对于新冠病毒核酸的qPCR检测。

作者简介

Dr. Nadine Lübke是医学专家病毒学家，也是德国杜塞尔多夫大学病毒研究所的基因分型和抗性测试负责人。她专注于研究对HIV的抗病毒治疗的抗性，最近获得了德国抗病毒病协会（DVV）和病毒学会（GfV）颁发的2019年临床病毒学科学奖。除了在艾滋病毒抗性测试领域的多年临床和科学工作外，Dr. Nadine Lübke还运用她的专业知识来帮助抗击COVID-19大流行。

您可以点击webinar链接，由Dr. Nadine Lübke为您详细介绍她的团队如何开发出这种简便快速的RT-qPCR检测方法来直接检测SARS-CoV-2，而不需要提取RNA。

杜塞尔多夫医院目前正在使用这种检测方法，在与感染患者接触的医生和工作人员中频繁地筛查COVID-19，这对于防止感染的局部传播至关重要。

页面更新：2021-10-19 14:16:51