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“天青色等烟雨,而我在等你”,
新冠疫苗|腺病毒载体疫苗研究解决方案

 
全球疫情肆虐期间,除了新冠疫情发展态势,备受瞩目的应该就是疫苗的研发进展了。
 
针对仍在持续的新冠肺炎疫情,全球科研机构加速研发新冠肺炎疫苗。据了解,全球已有超过180个国家和地区做出承诺加入“新冠肺炎疫苗实施计划”。涉及人口总量已占全球人口的90%。秉持人类卫生健康共同体理念,我国也已加入“新冠肺炎疫苗实施计划”。目前,我国已有4个新冠肺炎疫苗进入Ⅲ期临床试验阶段并且进展顺利,其中之一是腺病毒载体疫苗。
 
已进入Ⅲ期临床试验的腺病毒载体疫苗,采用了基因工程方法构建,以复制缺陷型人5型腺病毒为载体,表达新型冠状病毒S抗原,拟用于预防新型冠状病毒感染引起的疾病。Takara具备完善的重组腺病毒载体系统,为腺病毒载体疫苗研发提供新型研究工具,为新冠疫苗研发助力。
 
重组腺病毒载体系统
使用强大克隆技术,省去穿梭质粒,简化了重组腺病毒载体克隆步骤,加快了克隆速度。本系统基于人源5型腺病毒(Ad5)改造而成。由于腺病毒载体较大(∽34 kb),克隆难度较高,目前大多数腺病毒载体系统需要借助穿梭质粒,使用复杂的克隆程序来克服克隆困难这一问题。Takara Adeno-X Adenoviral System 3利用强大的In-Fusion HD克隆技术,不需要借助穿梭质粒就可以将目的基因直接克隆至腺病毒载体中,就像常规质粒构建一样简单快速。重要的是,将其它系统至少8天的克隆时间缩短至2-3天,同时确保克隆效率>90%。
另外,也可以提供四环素诱导表达型、无启动子通用型等重组腺病毒载体系统,适用于多种研究需求。
 
 
Code No. 产品名称 包装量
632269   Adeno-X Adenoviral System 3 (CMV) 10 Rxns
632267   Adeno-X Adenoviral System 3 (CMV, Green) 10 Rxns
632268   Adeno-X Adenoviral System 3 (CMV, Red) 10 Rxns
 
腺病毒滴度测定方案
·Adeno-X Rapid Titer Kit
这是一种功能滴度测定方法,基于腺病毒六邻体蛋白质进行测定。该试剂盒中包含一种六邻体蛋白质特异性抗体,用于标记感染细胞。六邻体蛋白质由腺病毒基因组编码,是腺病毒衣壳的重要组成部分,为腺病毒复制所需要,但是它的表达需要依赖于E1基因产物。因此,像HEK 293这样的E1基因反式互补细胞类型,可以用来测定腺病毒感染活性,原因是只有细胞被感染才能表达六邻体蛋白质。这种快速测定方法需要先花费1-2小时建立体系,两天后再花费大约3小时对细胞进行标记、染色和计数。每个染色细胞对应一个感染单位。这种检测方法可与1型、2型、5型和6型人腺病毒相兼容。
我们已经对基于5型人腺病毒的Adeno-X病毒进行了验证,Adeno-X病毒由Takara Adeno-X腺病毒载体系统所制备。
 
·Adeno-X qPCR Titration Kit
这是一种使用定量PCR技术测定腺病毒滴度的方法,快速、简单、高效。这种测定方法可以用于检测所有Ad5-based腺病毒载体,当然也可以检测使用Takara Adeno-X腺病毒载体系统所制备的重组腺病毒。结合使用了qPCR和TB Green,这样就可以依据校准的DNA标准曲线来确定腺病毒制剂(如粗裂解液或纯化病毒粒子)中的病毒基因组拷贝数。这种测定方法只需要大约4小时就可得出检测结果,而由于qPCR滴定花费时间短,所以实验人员在收获病毒的同一天,就可以使用经过准确滴定的病毒去感染目标细胞。
 
·Adeno-X GoStix
这是一种即时灵敏 (~10 min)的腺病毒滴度测定方法,让您可以迅速判断出腺病毒是否制备完毕以做好使用准备,也是确定扩增后收获病毒最佳时间的理想选择。只需要将20 μl培养液上清添加至GoStix检测板上样孔中,随后滴加4滴缓冲液,等待2-20分钟,检测板上的检测窗口会出现一条带。在上清液中检测到的腺病毒数量与细胞内产生的腺病毒是密切相关的。每次测试都可以保证足够高的灵敏度,使用少量病毒上清液就可以进行检测,也可以用于确保在腺病毒扩增过程中获得尽可能大的病毒收量(我们使用这些检测板来确定从感染细胞中收获病毒的最佳时间)。感染HEK293细胞后,每天只需要取20 μl上清液进行检测。检测窗口出现一条颜色很深的Test条带,可以确保在产毒高峰时期收获高滴度的腺病毒。
 
Code No. 产品名称 包装量
632250   Adeno-X Rapid Titer Kit 120 Titrations
632252   Adeno-X qPCR Titration Kit 200 Rxns
632270   Adeno-X GoStix 20 Tests
 
腺病毒纯化方案
想要简便快速地纯化腺病毒,可以选择基于色谱的腺病毒纯化系统。Takara开发的这种基于色谱的腺病毒纯化方法,可以在1.5小时内从感染细胞中纯化扩增后的腺病毒。
 
整个操作流程没有超速离心步骤,而是使用了一种特别的选择性结合腺病毒粒子的膜来进行色谱纯化。我们将膜装在一个小型的一次性滤芯中,可安全安装在标准尺寸的Luer-Lok注射器上。为了方便使用,注射器和过滤器组件都是预组装好的,随时可以使用。在过滤器和注射器之间还装配了一个单向阀,省去了纯化和洗涤过程中拆装注射器的麻烦。含有腺病毒的培养液通过连接到单向阀的管子吸入注射器,然后通过推出过滤器进行纯化。当含有病毒的培养液通过过滤器时,腺病毒粒子会吸附在膜上,将其从溶液中有效地分离出来。然后对结合在膜上病毒粒子进行洗涤和洗脱就可以获得高度纯化的病毒粒子。
 
这种纯化方法纯化的病毒滴度和纯度,与CsCl密度梯度离心法所获得的效果是相当的,病毒粒子和感染单位比可低至20:1。与CsCl密度梯度离心法不同的是,这种方法安全有效,不需要经过严格的培训,也不需要昂贵的设备,只需要简单操作就可以稳定获得高产量的纯化腺病毒。
 
对于大量病毒纯化,我们还贴心准备了大容量工具包。在这个工具包中,提供了注射泵来驱动澄清的裂解产物通过三层过滤器。在结合、洗涤和洗脱过程中,注射泵恒定的压力和流速非常有助于病毒回收。
 
 
Code No. 产品名称 包装量
631533   Adeno-X Maxi Purification Kit 6 Preps
631532   Adeno-X Maxi Purification Kit 2 Preps
631032   Adeno-X Mega Purification Kit 2 Preps
 
疫苗研发工作牵动人心。除了已进入Ⅲ期临床试验的4个新冠疫苗之外,我国也还有其它重组蛋白疫苗、mRNA疫苗和减毒流感病毒载体疫苗正在抓紧开展Ⅰ/Ⅱ期临床试验。目前药监局批准的第一个重组蛋白疫苗也正在组织三期临床。这让我们离新冠疫苗研发成功又多了一份希望。Takara不仅可以为腺病毒载体疫苗提供研究工具,也具有完备的重组蛋白疫苗上下游研究工具,为重组蛋白疫苗研究提供支持,请点击文末链接查看“加快重组蛋白疫苗研发的创新工具”。
 
“秋风萧瑟天气凉,草木摇落露为霜”,天气渐凉,秋意愈浓。秋冬季是呼吸道传染病高发季节,存在新冠肺炎疫情与呼吸道传染病叠加的风险。在此,Takara提醒大家,个人防护依旧不能松懈,应该继续保持良好卫生习惯,做到戴口罩、勤洗手、保持社交距离,做好秋冬季新冠肺炎疫情防控工作。Takara愿与您“疫”路同行,并肩抗“疫”,共同推动新冠肺炎疫苗的研发。
 
加快重组蛋白疫苗研发的创新工具
 

页面更新:2020-10-23 11:00:52