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技术控:如何使用智能手机10分钟解锁慢病毒滴度
 
近几年来,重组慢病毒载体已经成为一种非常通用的病毒基因导入工具,从基础研究到临床应用逐渐被广泛应用。使用重组慢病毒载体,可以将外源基因非常高效地转导至靶细胞中,实现稳定持续表达目的基因的效果。病毒滴度是慢病毒成功转导的关键因素。在这些应用中,需要准确地确定病毒载体的感染滴度,因为这将有助于提高转导效率以及转导细胞内的最终整合拷贝数。

不过,慢病毒滴度测定是一项费时费力的工作。根据所选择的方法不同,时间跨度从数小时到2周不等,操作复杂程度也因选择方法的不同而不同。为了进一步简化病毒滴度测定操作过程,缩短检测时间,Takara Bio公司开发出了Lenti-X GoStix Plus快速检测方法,能够以智能手机作为数据读取和分析工具,在十分钟之内定量检测重组慢病毒滴度,而不需要购买检测仪器。

Lenti-X GoStix Plus这种智能化快速检测方法,主要由Lenti-X GoStix Plus验毒棒和一款智能手机免费应用程序Lenti-X GoStix APP组成。Lenti-X GoStix Plus验毒棒可检测慢病毒衣壳蛋白质p24的存在,之后通过智能手机免费应用程序量化病毒滴度。使用这款智能手机应用程序,可以对慢病毒p24蛋白质的侧向层析检测进行分析,在10分钟内提供检测结果。
 
Lenti-X GoStix Plus
 
构思巧妙,基于侧向层析检测技术开发
目前研究用重组慢病毒载体所包含的主要结构蛋白质,包括包膜蛋白质、基质蛋白质、病毒核心蛋白质。p24是构成慢病毒粒子衣壳的一种主要结构蛋白质,由gag基因编码表达(同时表达核衣壳蛋白质p6和p7,基质蛋白质p17)。p24蛋白质的表达水平可以直接反映出病毒感染滴度高低。

Lenti-X GoStix Plus验毒棒基于侧向层析检测技术开发,可以快速检测慢病毒上清液中的p24蛋白质,通过测定慢病毒上清液中p24衣壳蛋白质的含量来确定慢病毒滴度。验毒棒检测框中Test指示条带的出现,说明样本中含有足够用量的慢病毒粒子,然后使用智能手机上的免费应用程序Lenti-X GoStix APP量化慢病毒滴度。
点击观看Lenti-X GoStix Plus操作视频,2分钟get操作要点。
 
手段智能,以智能手机APP为量化手段
使用智能手机免费应用程序对检测结果进行量化,获得准确的慢病毒滴度。

这款专门量身定制的智能手机应用程序,被命名为Lenti-X GoStix,使用免费,在iOS和Android设备上都能运行。使用这款应用程序,可以同时运行最多4个检测,只需要对每个检测进行对应命名,逐个扫描检测结果即可。

使用Lenti-X GoStix Plus,不需要自己建立标准曲线。Takara Bio事先为每个批次的Lenti-X GoStix Plus建立了标准曲线,打开Lenti-X GoStix APP并将移动设备连接到互联网,在输入批号或者扫描批次二维码后,会自动加载指定批号的标准曲线。这不仅可以缩短实验时间,降低实验成本,还可以更大限度地确保不同批次和不同实验间检测结果的准确性。Lenti-X GoStix APP可以记录保存每次的检测结果,为了避免数据丢失,检测人员也可以通过电子邮件将检测结果发送给自己便于保存记录。
(Lenti-X GoStix APP版本升级中,操作指导视频敬请期待……)
 
检测快速,10分钟完成滴度测定
使用Lenti-X GoStix Plus可以在10分钟完成慢病毒滴度测定。传统的滴度测定方法,如qPCR、ELISA或功能分析方法,不仅耗时长而且操作繁琐,不适用于监测上清液以确定最佳的病毒收获时间,也不适用于同时检测多个样本。Lenti-X GoStix Plus配合使用Lenti-X GoStix Plus验毒棒和Lenti-X GoStix APP,可以在10分钟内完成滴度测定。使用该应用程序的结果记录和邮件发送功能,还可以快速高效记录多个时间点和多个样本的检测结果。

没有对比就没有伤害。来,感受下。↓↓↓
上图比较了用Lenti-X-GoStix Plus和几种常用经典方法,测定慢病毒滴度所需要的时间(以小时为单位)。在这些检测方法中,使用Lenti-X-GoStix Plus进行检测耗时最短。①Lenti-X-GoStix:本文所介绍的基于侧向层析检测技术的慢病毒上清液中p24的检测方法;②qRT-PCR:通过qRT-PCR定量测定病毒RNA基因组;③ELISA:测定慢病毒衣壳蛋白质p24的含量;④PCR:通过qPCR检测整合DNA前病毒;⑤IFU(FACS):通过流式细胞仪分析RFP(红色荧光蛋白质)/GFP(绿色荧光蛋白质)阳性细胞确定感染细胞占总细胞数的百分比;⑥IFU(筛选):通过量化感染细胞群中耐药细胞克隆的数量来确定感染单位。
 
节约样品,只需要20 μl上清液
使用Lenti-X-GoStix Plus测定慢病毒滴度,每次检测只需要20 μl上清液作为检测样品,节约样品用量。您只需将20 μl包装细胞上清液,添加至GoStix验毒棒的上样孔中,再滴加3滴缓冲液,等待5-10分钟。Test指示条带出现后,使用APP扫描检测结果。
 
如此看来,智能手机不仅渗透入了生活和工作的各个方面,让我们的生活工作更加便捷高效。也在影响着我们的科研工作,让我们可以突破常用传统方法的限制,更加便捷快速地开展科研工作。
 
更多慢病毒滴度测定方案
关于重组慢病毒滴度测定,除了Lenti-X GoStix Plus这款更快速、更智能的慢病毒滴度测定试剂盒之外,Takara Bio还可以提供经典的ELISA和qRT-PCR检测方法试剂盒。
 
Lenti-X p24 Rapid Titer Kit
通过ELISA方法特异性检测重组慢病毒载体衣壳蛋白质p24,通过与试剂盒中提供的p24标准品制作的标准曲线相比较,就可以获得检测样品的病毒滴度。

· 通过简便的ELISA方法快速测定病毒滴度
· 4小时可完成病毒滴度测定
 
Lenti-X qRT-PCR Titration Kit
该试剂盒通过qRT-PCR方法检测上清液中的病毒基因组拷贝数,快速测定慢病毒滴度。将样品和试剂盒中提供的标准品RNA进行梯度稀释,然后分别进行qRT-PCR反应后绘制曲线。通过与标准曲线的Ct值比较,就可以获得样品所包含的病毒拷贝数。

· 通过一步qRT-PCR方法快速测定病毒滴度
· 4小时可完成病毒滴度测定
 
更多慢病毒滴度测定方案
福利1:本文涉及慢病毒滴度测定产品限时优惠,点击下方左侧图片了解促销详情,促销产品品目以促销页详情为准。
福利2:点击下方右侧图片,下载《Lenti-X™慢病毒系统和工具》,了解更多重组慢病毒基因导入系统和关联工具。
了解更多详情和性能表现,请点击:Lenti-X GoStix Plus