| 动植物基因型鉴定，哪些PCR酶值得选购？ | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| 基因分型是一种检测个体基因型的技术，它的对象可以是病毒或细菌，帮助我们通过追踪传染源来控制病原体的传播；可以是人，比如我们比较熟悉的骨髓/干细胞移植的HLA分型、肿瘤突变分型、DNA亲子鉴定等等；也可以是实验室经常研究的动植物，如鉴别基因敲除鼠等等。今天我们就来聊聊这其中的动植物基因分型，如果您恰好在做这方面研究，或者对这个领域感兴趣，不妨来了解一下。 转基因动植物的基因型鉴定是该研究领域关键而且重要的环节之一。目前，常规的转基因动植物鉴定主要涉及两类技术：第一种是以分子杂交技术为基础的Southern blot和斑点杂交，第二种则是以PCR技术为基础，发展起来的多种鉴定方法。Southern杂交虽然结果明确可靠，但是由于操作繁琐、耗时长、重现性差等缺点，并不太适用于环节众多，工作量较大的前期筛选阶段。而PCR技术的不断发展，则大大简化了这一流程。我们以实验室常见的模式动物小鼠为例，常规PCR筛选鉴定步骤如下： |
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| 组织取材→提取模板DNA→PCR反应→电泳→结果分析 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| 这其中，PCR反应作为当之无愧的“C位”担当，地位举足轻重。因此，选择一款适合的PCR酶，就显得尤为重要。 但是，现如今商品化的PCR酶种类繁多，适用性也不尽相同，究竟哪些值得选购？今天，我们就为大家种草两款适用于动植物基因型鉴定的PCR酶。 |
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| 推荐一：MightyAmp系列直接PCR |
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| 种草理由： | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ 抑制剂耐受性高 ■ 无需DNA纯化 ■ 操作简便，省时省力 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| Takara MightyAmp DNA聚合酶有很强的扩增性能，对于使用普通PCR酶难以扩增 (含有PCR阻害物) 的粗提样品显示很好的扩增能力。无需DNA纯化，可直接使用动植物、血液、加工食品、FFPE、FTA卡等样品进行PCR扩增，避免了由于多步样品制备造成的基因组DNA的损失，节省了时间，降低了成本。助力动植物基因分型，是您做直接PCR的理想选择！ |
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| 1. 跳过复杂的模板提取纯化过程，可使用样品或粗提品直接进行扩增 |
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| 参考如下MightyAmp™ Genotyping Kit（Code No. R074A）操作流程图 |
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| 2. 种类繁多的样品可以进行直接PCR |
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| 3. 小鼠尾及动植物等样品的PCR扩增实验例 |
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| 4. MightyAmp系列制品一览表 |
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| 推荐二：EmeraldAmp绿宝石系列Premix PCR酶 |
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| 种草理由： | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| ■ 操作简便，适用于大批量样本 ■ 收量高 ■ Plus dye，可直接电泳 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| EmeraldAmp绿宝石系列是PCR反应用各种试剂（酶、Buffer、dNTP Mixture等）的2倍浓度的预混型制品。使用本制品时，只需要在制品溶液中加入模板和引物便可进行PCR反应，简化了操作步骤。并且，本制品中已含有电泳时所必需的色素试剂（蓝色和黄色色素），PCR反应后可以直接进行电泳。反应液为鲜艳的绿色（Emerald Green），电泳时指示效果明显，容易观察样品的电泳位置。 |
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| 以EmeraldAmp® MAX PCR Master Mix（Code No. RR320）为例，相比于Premix Taq/Ex Taq plus dye来说，有如下优势： |
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| ① 制品性能更卓越，制品中使用了具有高扩增性能的DNA聚合酶和最适Buffer，也适用于长片段的扩增。以人基因组DNA为模板可以扩增15 kb的DNA片段。 ② 性价比高，单次反应价格较低。 |
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| 1. 操作简便，可直接电泳 |
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| 2.Technote：高通量筛选-通过PCR方法进行基因分型 |
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| 简介 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| 什么情况下，适合使用传统PCR作为高通量筛选方法？ | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| Endpoint PCR是一种有效、可靠且成本较低的高通量筛选方法。先对大量样品进行常规PCR反应后，用琼脂糖凝胶电泳进行分析，应用于基因分型或进行常规的两步法RT-PCR筛选标记基因的表达等。 |
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| 可能遇到的问题 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| 高效的工作流程如何能够确保高通量PCR筛选项目的成功？ | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| 当进行数十个、数百个甚至数千个PCR反应时，效率是至关重要的：工作效率的每一个改进都会显著节省时间。减少移液的步骤能尽可能减少污染和误差的可能性，并可将重复性操作带来的损失降到最低。简化筛选程序也能使不同的实验室人员之间实现更好的标准化操作，这对于扩大筛选项目至关重要。 |
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| 典型的Endpoint PCR筛查分析包括： |
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| · 确定是否存在目标序列（例如，转基因序列） · 等位基因测定（例如，可变重复序列、RFLP分析、插入和删除） · 在正向或反向基因筛选中识别突变体 · 利用RT-PCR技术筛选生物标志物基因的表达 |
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| 解决方案 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| EmeraldAmp绿宝石系列，优化用于高通量PCR | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| Takara EmeraldAmp绿宝石系列PCR酶经过优化，能够助力高效完成常规Endpoint PCR和PCR筛选项目（如对大量样本进行基因分型）工作，并且制品性能卓越、性价比高。该系列是PCR反应用的DNA Polymerase、Buffer、dNTP Mixture的2倍浓度的混合物。使用时，只需在制品溶液中加入模板和引物便可进行PCR反应。PCR后的样品可以直接上样电泳、用于酶切、也可以方便克隆到T载体上。 |
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| 点击查看Technote详情。 |
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| 3. EmeraldAmp绿宝石系列制品一览表 |
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页面更新：2020-06-22 08:54:11
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