酵母杂交实验快速工具集锦 |
| 复产复工在即，是时候回实验室开工做实验了。今天就向您介绍几个好用的工具，让您的酵母杂交实验更加简单顺畅！ |
| 文库获取 |
| 一、【拟南芥预制文库】省去了繁琐的建库流程，文库菌液可以直接用于mating方法进行筛选： |
| 630487 Mate & Plate™ Library - Universal Arabidopsis (Normalized) |
| 拟南芥均一化预制文库是高度复杂的cDNA文库，文库克隆到GAL4 AD载体上并转化到酵母菌株Y187中。因为文库扩增和酵母转化操作已经完成，所以使用这些文库进行双杂交筛选更加省时省力。均一化处理降低了文库中高丰度的转录本，使低丰度及稀少的cDNA得以富集，这样的文库更加具有基因代表性，也使筛选操作更加简单，并大大降低了在筛选文库时获得假阳性的可能性。 |
| 制品特点 |
| · 包含拟南芥不同生长时期和不同部分组织的cDNA酵母文库 · 文库经过均一化处理，确保高、低丰度基因表达量均衡 · 通用型文库，具有更高的基因代表性 · 筛选不再大海捞针 |
| * Takara公司的预制文库还有Hela S3预制文库、小鼠脑组织文库、人脑组织文库、果蝇预制文库等，详情请点击：Mate & Plate预制文库 均一化Mate & Plate文库 |
| 二、【快速建库试剂盒】如果没有找到合适的预制文库，可以自己制作，简单快速： |
| 630490 Make Your Own "Mate & Plate" Library System |
| 构建和筛选一个传统的酵母双杂交文库是非常繁冗的。如果预制文库中没有适合您需要的文库，您可使用Make Your Own Mate & Plate Library System自己制作文库。利用该系统，一周之内即可构建足够用于数百次酵母双杂交筛选实验所需的文库。文库构建是在Y187文库酵母菌株中通过酵母高效的同源重组机制直接完成，无需传统构建过程中的文库克隆、扩增和大肠杆菌收集等繁琐操作。 |
| 制品特点 |
| · 利用SMARTer技术一步合成cDNA · 根据同源重组原理直接构建酵母菌文库 · 通无需繁琐的克隆和文库扩增 · 为酵母双杂交文库筛选提供简便方法 |
| SMARTer技术合成原cDNA原理 |
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| 诱饵载体构建 |
| 一、【简便&快速酵母转化试剂】无需制备感受态细胞，酿酒酵母菌小规模转化仅需1.5 hr |
| 631851 Quick & Easy Yeast Transformation Mix |
| Quick & Easy Yeast Transformation Mix用于酿酒酵母或毕赤酵母的小规模转化，操作简便、节省时间。 |
| 制品特点 |
| · 酿酒酵母的转化只需1.5 hr，毕赤酵母的转化只需30 min · 无需制备酵母感受态细胞 · 可用平板培养1个月左右的酿酒酵母细胞起始转化 |
| 与一般酵母转化试剂的流程对比 |
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| 二、【预混型培养基】一次性铝箔袋包装的预混粉末，无需称量，让您配制培养基宛如冲调速溶咖啡一样简单 |
| 630306-630307 预混型YPDA培养基 |
| 酵母菌完全营养培养基，可以用于未转化的酵母菌培养。培养基采用优化后的配方，可以有效防止酵母菌落变红。袋装的预混培养基，方便使用。 |
| 630308-630325 预混型SD筛选培养基 |
| 在每个特定的预混型SD筛选培养基中，已经去掉了相应的氨基酸。例如，SD/-Leu/-Trp包含除亮氨酸和色氨酸之外的所有必需氨基酸。使用时仅需要将袋中的所有组分倒入三角瓶或培养瓶中，加入0.5 L的dH2O，然后灭菌即可。不需要单独称量、混合，也不需要调整pH值。 |
| 制品特点 |
| · 无需称量、混合、调整pH值 · 只需加入水，混合灭菌即可使用 |
| 阳性克隆验证 |
| 一、【酵母菌落PCR试剂盒】直接挑取阳性克隆进行菌落PCR，初步判定插入片段的有无和大小： |
| 630497 Matchmaker Insert Check PCR Mix 2 |
| 可以简便快速地直接以酵母菌落为模板进行PCR扩增。这种完整的混合液专用于 Matchmaker Gold 酵母单杂交和双杂交筛选系统，可以快速地扩增、分选并分析文库筛选所获得的阳性克隆中prey/文库质粒的cDNA插入片段。试剂混合液中包含PCR聚合酶、引物、dNTPs和缓冲液，仅仅需要将细胞添加到混合液中，然后进行30个循环PCR操作。引物也可以单独购买。 |
| 制品特点 |
| · 直接以酵母菌落为模板进行PCR扩增，操作简单快速 · 包含引物，dNTPs和缓冲液的预混试剂，只需要加入细胞即可 |
| 酵母菌落PCR实验流程 |
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| 二、【酵母质粒提取试剂盒】利用酵母裂解酶破碎酵母细胞壁，让您提取酵母质粒就像提取细菌质粒一样简单： |
| 630467 Easy Yeast Plasmid Isolation Kit |
| 利用酵母裂解酶破碎酵母细胞壁，并用SDS/碱裂解法获得酵母原生质体。采用Yeast Plasmid SPIN 纯化柱纯化质粒DNA，然后转化大肠杆菌进行扩繁，或作为模板用于PCR分析。 |
| 制品特点 |
| · 用纯化柱法提取酵母质粒 · 包含高效的酵母裂解酶 · 用较少的时间纯化DNA |
| 酵母质粒提取实验流程 |
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| 互作蛋白质验证 |
| 【快速免疫共沉淀试剂盒】：区别于传统的琼脂糖珠的方法，将protein A作为配基固定到优化的Capturem膜上，仅需几步离心操作就可以快速获取抗体-蛋白质-蛋白质复合物 |
| 635721 Capturem™ IP & Co-IP Kit |
| Capturem™ IP & Co-IP Kit应用于IP和Co-IP实验，为快速提取独立蛋白质或提取蛋白质-蛋白质复合物提供了完整、易用性的解决方案。它是一款基于新型膜技术的高性能“抗体-蛋白质”复合物纯化试剂盒，其中包含实验必备试剂，同时也提供结合、洗涤和洗脱buffer。实验从样品上样至洗脱完成仅需5 min。 |
| 制品特点 |
| · 简单和快速的实验流程：抗体与样品孵育，之后在室温下进行的纯化仅需5 min · 试剂盒中包含用于IP和Co-IP实验的Capturem Protein A纯化柱和buffer，且均经过优化处理 · 洗脱液体积小，产物浓度高 · 样品在膜上停留时间短，避免复合物的凝集、解体或失活 |
| Capturem™ IP & Co-IP Kit与普通Co-IP产品提取流程对比 |
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| 采用以上工具可以有效提高酵母杂交各步骤的实验速度，让您体会“开挂”一样的实验人生！ |
| 点击观看Takara酵母杂交技术在线讲座 |
页面更新：2020-07-01 08:20:32
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