与疫情赛跑，一步法RT-qPCR快速筛查新冠病毒 |
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多人死亡，往返中国的航班取消，潜在接触者被隔离，促使世界卫生组织（WHO）宣布新型冠状病毒（2019-nCoV）疫情被划入“国际关注的突发公共卫生事件”（PHEIC）。截至2020年2月10日，2019-nCoV引发的呼吸道疾病已导致全球1000余人死亡，4万余人确诊患病。
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| 冠状病毒是一类能引起上呼吸道和下呼吸道疾病的病毒，具有类似太阳冠冕的特征性尖刺外观。许多常见的冠状病毒通常会导致轻度到中度的症状，但有些病毒会导致严重的症状，并可能发展为致命的肺炎，比如在2003年爆发的SARS-CoV 和2015年的MERS-CoV。由于2019-nCoV引发的肺炎导致多人死亡，且可能潜在的无症状个体传播，因此，对该病毒进行有效的实验室筛查对控制此次疫情至关重要。 |
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| 2020年1月24日，中国疾病预防控制中心等权威机构发布了鉴定2019-nCoV的文献《A Novel Coronavirus from Patients with Pneumonia in China, 2019》。文章中，作者开发了一种病毒筛选方法，通过RNA-Seq技术获得了特异性病毒序列，对2019-nCoV进行测序和分类，还使用光镜和透射电镜观察了2019-nCoV感染的人呼吸道上皮细胞中培养物的病毒颗粒和细胞病变效应。这其中使用了Takara探针法One Step PrimeScript™ RT-PCR Kit (Perfect Real Time)（Code No. RR064）。 |
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| 中国科学院武汉病毒研究所发表的文章《Discovery of a novel coronavirus associated with the recent pneumonia outbreak in humans and its potential bat origin》，已经鉴定出该病毒在整个基因组水平上与蝙蝠冠状病毒96%相同，对7种保守的非结构蛋白的成对序列分析表明，该病毒属于SARSr-CoV。重要的是，他们证实2019-nCoV使用了与SARS冠状病毒相同的细胞进入受体ACE2。该团队使用了Takara的SMARTer RACE 5'/3' Kit（Code No. 634858） 用于确定病毒基因组的5'末端序列。 |
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| 另一个研究小组（Letko和Munster 2020）利用Takara高效率无缝克隆技术In-Fusion HD Cloning Kit（Code No. 639648）克隆了该病毒的刺突编码序列，研究了2019-nCoV的细胞进入机制。 |
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| 类似的方法已经被许多组织用来识别这种特殊病毒的其他部分。中国疾病预防控制中心推荐了One Step PrimeScript™ RT-PCR Kit (Perfect Real Time)（Code No. RR064）用于2019-nCoV的检测，并已经在中国各地被广泛使用。世界卫生组织（WHO）和疾病预防控制中心（CDC）已经开发出类似的方法，随着更多病例的报道，WHO将对病毒检测方法提出更多建议。 |
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我们正迅速行动，以满足中国以及其他国家不断增加的2019-nCoV筛查需求。
Takara 愿以高质量的产品和热忱的服务，为2019-nCoV筛查贡献绵薄之力。 |
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| 山川异域，风月同天。守望相助，众志成城。 |
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| Takara提供2019-nCoV筛查完整解决方案 |
| 产品 |
Code No. |
包装量 |
用途 |
| DNA-OFF® |
9036 |
500 ml |
去除实验区域DNA污染 |
| RNase-OFF® |
9037 |
500 ml |
去除RNase污染 |
| TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0 |
9766 |
50 次 |
柱式法病毒核酸提取 |
| RNAiso Plus |
9108/9109 |
100/200 ml |
试剂型Total RNA提取 |
| One Step PrimeScript™ RT-PCR Kit (Perfect Real Time) |
RR064A/B |
100/500 次 （50 μl反应） |
probe法One Step RT-qPCR |
| PrimeDirect® Probe RT-qPCR Mix |
RR650A/B |
200/1,000 次（25 μl反应） |
无需RNA纯化，直接进行probe法One Step RT-qPCR |
| PrimeDirect® Probe RT-qPCR Mix, with UNG |
RR651A/B |
200/1,000 次（25 μl反应） |
RR650的UNG版本，防止假阳性 |
| One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix |
RR600A/B |
200/1,000 次（25 μl反应） |
完全premix型probe法One Step RT-qPCR |
| One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix, with UNG |
RR601A/B |
200/1,000 次（25 μl反应） |
RR600的UNG版本，防止假阳性 |
| Uracil DNA Glycosylase (UNG), heat-labile |
2820 |
200 U |
防止Carryover污染导致的假阳性 |
| dU plus dNTP Mixture (12.5×) |
4035 |
800 μl |
防止Carryover污染导致的假阳性 |
| dNTP Mixture |
4030 |
各3.2 μmol/1.28 ml |
PCR底物 |
| dNTP Mixture |
4019 |
各2.5 μmol/250 μl |
PCR底物 |
| Reverse Transcriptase M-MLV (RNase H-) |
2641A/B |
10,000/40,000 U |
反转录酶 |
| Recombinant RNase Inhibitor |
2313A/B |
5,000/25,000 U |
RNase抑制剂 |
| T7 RNA Polymerase |
2540A/B |
5,000 U/25,000 U |
RNA标准品的体外转录 |
| RNase-free Water |
9012 |
1 ml×10 支 |
RNA实验用水 |
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除上述目录产品外，Takara不断完善病毒检测方案，提供WHO、中国疾病预防控制中心公布指导的引物探针套装、美国疾病控制与预防中心公布指导的引物探针套装。
同时，引物探针套装中还增加了所有检测靶点Control RNA产品。 |
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| 一、新型冠状病毒（2019-nCoV）ORF1ab基因、E蛋白基因、N蛋白基因检测套装： |
| 序号 |
Primer/Probe名称* |
碱基序列 (方向为5' to 3')* |
5'修饰 |
3'修饰 |
Control RNA** |
| 01 |
2019-nCoV RdRP_SARSr-F2 |
GTG ARA TGG TCA TGT GTG GCG G |
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Ger-RdRP |
| 02 |
2019-nCoV RdRP_SARSr-R1 |
CAR ATG TTA AAS ACA CTA TTA GCA TA |
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| 03 |
2019-nCoV RdRP_SARSr-P2 |
CAG GTG GAA CCT CAT CAG GAG ATG C |
FAM |
BHQ-1 |
| 04 |
2019-nCoV RdRP_SARSr-P1 |
CCA GGT GGW ACR TCA TCM GGT GAT GC |
FAM |
BHQ-1 |
| 05 |
2019-nCoV E_Sardeco-F1 |
ACA GGT ACG TTA ATA GTT AAT AGC GT |
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Ger-E |
| 06 |
2019-nCoV E_Sardeco-R2 |
ATA TTG CAG CAG TAC GCA CAC A |
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| 07 |
2019-nCoV E_Sardeco-P1 |
ACA CTA GCC ATC CTT ACT GCG CTT CG |
FAM |
BHQ-1 |
| 08 |
2019-nCoV N_Sarbeco_F1 |
CAC ATT GGC ACC CGC AAT C |
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Ger-N |
| 09 |
2019-nCoV N_Sarbeco_R1 |
GAG GAA CGA GAA GAG GCT TG |
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| 10 |
2019-nCoV N_Sarbeco_P1 |
ACT TCC TCA AGG AAC AAC ATT GCC A |
FAM |
BHQ-1 |
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| 二、新型冠状病毒（2019-nCoV）ORF1ab/N基因检测套装： |
| 序号 |
Primer/Probe名称* |
碱基序列 (方向为5' to 3')* |
5'修饰 |
3'修饰 |
Control RNA** |
| 11 |
2019-nCoV nsp14F |
TGG GGY TTT ACR GGT AAC CT |
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HK-ab1 |
| 12 |
2019-nCoV nsp14R |
AAC RCG CTT AAC AAA GCA CTC |
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| 13 |
2019-nCoV nsp14P |
TAG TTG TGA TGC WAT CAT GAC TAG |
FAM |
TAMRA |
| 14 |
2019-nCoV NF |
TAA TCA GAC AAG GAA CTG ATT A |
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HK-N |
| 15 |
2019-nCoV NR |
CGA AGG TGT GAC TTC CAT G |
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| 16 |
2019-nCoV NP |
GCA AAT TGT GCA ATT TGC GG |
FAM |
TAMRA |
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| 根据中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所公布指导，Takara提供一个qPCR引物探针套装： |
| 序号 |
Primer/Probe名称* |
碱基序列 (方向为5' to 3')* |
5'修饰 |
3'修饰 |
Control RNA** |
| 17 |
CDC 2019-nCoV ORF1ab-F |
CCCTGTGGGTTTTACACTTAA |
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CDC-ORF1ab |
| 18 |
CDC 2019-nCoV ORF1ab-R |
ACGATTGTGCATCAGCTGA |
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| 19 |
CDC 2019-nCoV ORF1ab-P |
CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG |
FAM |
BHQ-1 |
| 20 |
CDC 2019-nCoV N-F |
GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT |
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CDC-N |
| 21 |
CDC 2019-nCoV N-R |
CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG |
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| 22 |
CDC 2019-nCoV N-P |
TTGCTGCTGCTTGACAGATT |
FAM |
TAMRA |
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| 根据美国疾病控制与预防中心公布指导，Takara提供一个qPCR引物探针套装： |
| 序号 |
Primer/Probe名称* |
碱基序列 (方向为5' to 3')* |
5'修饰 |
3'修饰 |
Control RNA** |
| 23 |
US CDC 2019-nCoV_N1-F |
GACCCCAAAATCAGCGAAAT |
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US-N1 |
| 24 |
US CDC 2019-nCoV_N1-R |
TCTGGTTACTGCCAGTTGAATCTG |
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| 25 |
US CDC 2019-nCoV_N1-P |
ACCCCGCATTACGTTTGGTGGACC |
FAM |
BHQ-1 |
| 26 |
US CDC 2019-nCoV_N2-F |
TTACAAACATTGGCCGCAAA |
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US-N2 |
| 27 |
US CDC 2019-nCoV_N2-R |
GCGCGACATTCCGAAGAA |
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| 28 |
US CDC 2019-nCoV_N2-P |
ACAATTTGCCCCCAGCGCTTCAG |
FAM |
BHQ-1 |
| 29 |
US CDC 2019-nCoV_N3-F |
GGGAGCCTTGAATACACCAAAA |
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US-N3 |
| 30 |
US CDC 2019-nCoV_N3-R |
TGTAGCACGATTGCAGCATTG |
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| 31 |
US CDC 2019-nCoV_N3-P |
AYCACATTGGCACCCGCAATCCTG |
FAM |
BHQ-1 |
| 32 |
US CDC RP-F（内参检测用） |
AGATTTGGACCTGCGAGCG |
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| 33 |
US CDC RP-R（内参检测用） |
GAGCGGCTGTCTCCACAAGT |
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| 34 |
US CDC RP-P（内参检测用） |
TTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG |
FAM |
BHQ-1 |
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| *所有引物探针为HPLC纯化级别，客户可以根据需要选择合适的套装。 |
| **Control RNA产品需单独订购，订购时请咨询各地代理商。 |
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| Takara还可以提供使用简便、性价比高、可靠的Real Time PCR仪Thermal Cycler Dice Real Time System III (Code No. TP950)。 除具有以往Takara PCR仪受到好评的友好操作软件外，还搭载触摸屏控制面板，可进行单机 (独立) 操作，以追求操作简便性。 |
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| 特点介绍： |
◇ 搭载触摸屏，可独立操作，支持英语/日语界面，仪器软件更加追求操作简便性。
◇ 可做高速定量PCR反应。
使用嵌合荧光染料检测法时，与试剂TB Green Fast qPCR Mix（Code No. RR430）搭配使用，TP950可完成快速定量PCR反应。
◇ 专为科研用户设计的便于操作的定量软件。 |
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京公网安备 110114000405号