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新冠肺炎疫情来势汹汹,Takara助力病毒检测

 
2019年12月31日,武汉卫健委首次发布病毒性肺炎通报。
2020年1月9日,在科研人员的快速应对下,排除了流感、禽流感、腺病毒、传染性非典型肺炎(SARS)和中东呼吸综合征(MERS)等呼吸道病原,检出一种新型冠状病毒,并获得该病毒的全部基因组序列。
2020年1月12日,世界卫生组织正式将造成新冠肺炎疫情的新型冠状病毒命名为“2019新型冠状病毒(2019-nCoV)”。同时,世界卫生组织(WHO)于同日发布了针对疑似新型冠状病毒感染造成严重急性呼吸道感染的临床处置指南。指南中在“采集临床标本用于实验室诊断”部分说明,收集上呼吸道(upper respiratory tract,URT,包括鼻咽和口咽)和下呼吸道(lower respiratory tract,LRT,包括痰、气管内吸出物或支气管肺泡灌洗液)的标本,通过RT-PCR进行nCoV检测;仅在无法使用RT-PCR时才建议使用血清学进行诊断。
2020年1月17日,世界卫生组织(WHO)网站发布,已经开发出或正在开发几种检测新型冠状病毒的检测方法,希望能为相关实验室提供经过一定程度验证的测定方法。
 
根据WHO发布的《Diagnostic detection of 2019-nCoV by real-time RT-PCR》 (Charité Virology, Berlin, Germany),使用已知的SARS和SARS相关冠状病毒(研究和文献来源的蝙蝠病毒)进行非冗余比对,设计了候选诊断性RT-PCR分析方法。所有测定均可以使用SARS-CoV基因组RNA作为阳性对照。
 
新冠病毒基因组扩增子的相对位置
 
Takara作为众多检测试剂盒生产商的合作伙伴,一直以提供高品质、高稳定性、高性价比的原料和高效率的服务为宗旨,可以为新型冠状病毒检测提供多种解决方案。
 
病毒检测用引物、探针合成
 
根据WHO发布的指导,Takara提供两个qPCR引物探针套装:
 
一、新型冠状病毒(2019-nCov)ORF1ab基因、S蛋白基因、N蛋白基因检测套装
序号 Primer/Probe名称* 碱基序列 (方向为5' to 3')* 纯化方式 5'修饰 3'修饰
01 2019-nCoV RdRP_SARSr-F2 GTG ARA TGG TCA TGT GTG GCG G HPLC    
02 2019-nCoV RdRP_SARSr-R1 CAR ATG TTA AAS ACA CTA TTA GCA TA HPLC    
03 2019-nCoV RdRP_SARSr-P2 CAG GTG GAA CCT CAT CAG GAG ATG C HPLC FAM BHQ-1
04 2019-nCoV RdRP_SARSr-P1 CCA GGT GGW ACR TCA TCM GGT GAT GC HPLC FAM BHQ-1
05 2019-nCoV E_Sardeco-F1 ACA GGT ACG TTA ATA GTT AAT AGC GT HPLC    
06 2019-nCoV E_Sardeco-R2 ATA TTG CAG CAG TAC GCA CAC A HPLC    
07 2019-nCoV E_Sardeco-P1 ACA CTA GCC ATC CTT ACT GCG CTT CG HPLC FAM BHQ-1
08 2019-nCoV N_Sarbeco_F1 CAC ATT GGC ACC CGC AAT C HPLC    
09 2019-nCoV N_Sarbeco_R1 GAG GAA CGA GAA GAG GCT TG HPLC    
10 2019-nCoV N_Sarbeco_P1 ACT TCC TCA AGG AAC AAC ATT GCC A HPLC FAM BHQ-1
 
二、新型冠状病毒(2019-nCov)ORF1ab/N基因检测套装
序号 Primer/Probe名称* 碱基序列 (方向为5' to 3')* 纯化方式 5'修饰 3'修饰
11 2019-nCoV nsp14F TGG GGY TTT ACR GGT AAC CT HPLC    
12 2019-nCoV nsp14R AAC RCG CTT AAC AAA GCA CTC HPLC    
13 2019-nCoV nsp14P TAG TTG TGA TGC WAT CAT GAC TAG HPLC FAM TAMRA
14 2019-nCoV NF TAA TCA GAC AAG GAA CTG ATT A HPLC    
15 2019-nCoV NR CGA AGG TGT GAC TTC CAT G HPLC    
16 2019-nCoV NP GCA AAT TGT GCA ATT TGC GG HPLC FAM TAMRA
 
客户可以根据需要选择合适的套装。
 
为能够快速满足客户需求,春节期间启动紧急方案,不间断提供合成服务。
如需订购,请与Takara各地代理商联系:
https://www.takarabiomed.com.cn/Map.aspx?m=20141216153902390443
 
 
病毒核酸提取
 
TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0(Code No. 9766)是专门用于从血浆、全血、无细胞体液、病毒原液和感染病毒的组织中提取各种病毒 (Virus) RNA/DNA的小量纯化试剂盒。具有高效、快速、方便的特点,病毒裂解后,提取操作仅需20分钟便可完成。本试剂盒配有Carrier RNA可提取样品中微量的RNA/DNA。
 
从 HL60 细胞培养液、全血、唾液、尿液、小鼠肝脏中提取 HAV 病毒 RNA,并进行 RT-PCR 检测的实验例。使用本试剂盒从 200 μl 培养细胞(HL60)、 10 μl 全血、200 μl 唾液、200 μl 尿液、10 mg 小鼠肝脏中提取 HAV RNA,并使用 TaKaRa One Step RNA PCR Kit(AMV) (Code No. RR024)进行 RT-PCR 得到 289 bp 片段,其电泳结果见图。
 
高效的探针法One Step RT-qPCR解决方案
 
Takara经典的一步法探针RT-qPCR试剂盒——One Step PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time)(Code No. RR064A/B),上市多年来,已经得到众多检测公司、CDC的青睐,以高质量、高灵敏度、高稳定性的特点获得了越来越多的客户的信任。
使用One Step PrimeScriptRT-PCR Kit (Perfect Real Time)(Code No. RR064A/B)进行RT-qPCR,反应可在同一反应管内连续进行,操作简单,并能有效防止污染。该制品包含了高灵敏度的反转录酶PrimeScript RTase和具有高扩增效率和高扩增特异性的TaKaRa Ex Taq HS,稳定高效,非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。并已确认,在多种Real Time PCR仪器可获得良好的反应性能。
另外,同其他公司制品相比,RR064可在短时间内完成PCR分析。
 
*已有客户采购RR064进行新型冠状病毒检测试剂盒的研发。
 
无需提取RNA,样本直接进行探针法One Step RT-qPCR的快速解决方案
PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix (or with UNG)(Code No.RR650/RR651)是基于探针法检测的一步法Real Time RT-PCR试剂。本制品为2X premix型试剂,只需添加用于检测目的基因的引物、探针和模板即可进行反应。本制品在反应液中能够直接从生物样本中提取核酸,对于含有RNA病毒的生物样品,可直接添加到反应液中进行Real Time PCR反应。由于核酸提取、反转录、qPCR各反应在一个反应管中连续进行,大大提高了操作简便性,减少了反应时间。
 
 
 
 
春节将至,Takara祝福大家新春快乐,身体健康,另外,转发世卫组织中国代表处官方微博的提醒,春节期间注意以下措施,保护自己。
1) 用肥皂和清水或含有酒精的洗手液洗手。
2) 咳嗽或打喷嚏时,用纸巾或屈肘遮住口鼻。
3) 将肉蛋彻底煮熟。
4) 避免与任何有感冒或类似流感症状的人密切接触。
5) 避免在未加防护的情况下接触野生动物或养殖动物。
6) 不要随地吐痰。
武汉卫生健康委同时提醒,目前正处于冬春季传染病高发季节,应注意保持室内空气流通,尽量避免到封闭、空气不流通的公众场合和人群集中地方,必要时可佩戴口罩。如有发热、呼吸道感染症状,特别是持续发热不退,要及时到医疗机构就诊。