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    非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus,ASFV)是一种古老的、高度传染的、能够使家猪和野猪致死的病毒,2018年8月中国确诊首例非洲猪瘟疫情开始,一年多的时间,非洲猪瘟已经席卷了黑龙江、江苏、浙江、内蒙古、辽宁、山西等多个省份,给养殖业带来了巨大损失,猪肉价格也节节攀升登上历史高位。
    通过实验室检测,对非洲猪瘟病毒进行快速、可靠的早期诊断,对于防止疫病的传播非常重要和必要的。根据2018年8月中国动物卫生与流行病学中心和中国动物疫病预防控制中心编制的《非洲猪瘟病毒检测操作规程》,需要使用实时荧光定量PCR方法对非洲猪瘟病毒进行检测。
    Takara作为分子生物学试剂行业内的重要一员,多年来持续不断地为中国各科研院校、检验检疫单位和各种检测机构提供性能稳定、高效高质量的研究用试剂,受到广大生物学研究人员的支持和好评。Takara可以提供从探针、引物合成到定量PCR检测的多种灵活的非洲猪瘟病毒ASFV检测解决方案。
 
 
 
 
根据2003年发表于《Journal of Virological Methods》期刊的文献《Development of a TaqMan PCR assay with internal amplification control for the detection of African swine fever virus》,探针法定量PCR扩增ASFV的主要免疫原基因VP72的3'保守区, PCR引物和探针序列如下表:
 
 
 
 
 
★ MightyPrep reagent for DNA(Code No. 9182)是用于从小鼠尾等动物组织及植物组织、血液、加工食品、土壤、菌体等中简便、高收量的制备PCR用模板DNA的试剂。使用时在样品中添加本试剂,仅需95℃加热10分钟即可简易提取DNA。
 
添加试剂(MightyPrep reagent for DNA)后,仅需95℃加热10分钟即可简易提取DNA。
只有一种添加试剂!可直接使用。
与阻害物抵抗性高的PCR试剂配套使用,可对宽广范围内的样品进行PCR扩增。
 
 
  推荐阅读:样本DNA的快速简易提取
 
★ Probe qPCR Mix(Code No. RR391A)是采用探针法进行Real Time PCR(qPCR)检测的试剂。 通过对添加了抗体的Hot Start PCR酶和Real Time PCR用Buffer分别进行了改良,实现了PCR阻害物抵抗性高、扩增特异性高、扩增效率高、检测灵敏度高。
 
各种PCR阻害物对Ct值的影响评价
已知血红素(血液成分)、腐植酸(土壤成分)、黑色素(皮肤和毛发成分)、单宁酸(植物成分)对PCR反应有很强的阻害作用,对在PCR反应中添加PCR阻害物的反应体系和未添加PCR阻害物的反应体系进行了Ct值比较。 本制品同其他公司同类制品相比,对PCR阻害物的抵抗性显著提高,使用目前为止不能获得良好反应结果的检测样品也能够期待 获得高成功率、高检测灵敏度的PCR反应。
 
 
  推荐阅读:阻害物高抗性的探针法qPCR Mix
 
 
★ TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0 (Code No. 9766)是专门用于从血浆、全血、无细胞体液、病毒原液和感染病毒的组织中提取各种病毒 (Virus) RNA/DNA的小量纯化试剂盒,具有高效、快速、方便之特点,病毒裂解后,提取操作仅需20分钟便可完成。
 
Premix Ex Taq™ (Probe qPCR)(Code No. RR390)是采用探针法进行Real Time PCR (qPCR) 反应的专用试剂,可用于快速PCR。Premix Ex Taq是一种2×浓度的Premix Type试剂,进行实验时,PCR反应液的配制十分方便简单。
 
Mix中添加了Tli RNaseH (耐热性RNaseH),以cDNA 作为模板进行PCR反应时,可以很好地抑制由于cDNA中残存mRNA对PCR反应造成的阻害作用。本制品可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对靶基因进行准确定量、检测,重复性好,可信度高。
 
 
★ PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix (or with UNG)(Code No. RR650/RR651)是基于探针法检测 的一步法Real Time RT-PCR试剂。本制品为2× premix型试剂,只需添加用于检测目的基因的引物、探针和模板即可进行反应。由于本制品在反应液中能够直接从生物样本中提取核酸,对于含有RNA病毒等的生物样品,可直接添加到反应液中进行Real Time PCR反应。由于核酸提取、反转录、qPCR各反应连续进行,大大提高了操作简便性,减少了反应时间。
 
活体样品起始简便快速进行Real Time PCR检测
   
探针法one step RT-qPCR premix试剂
   
血液、尿液等样品无需RNA纯化也可进行Real Time PCR
   
通过UNG的作用,可以有效防止carryover contamination产生的假阳性
※ 使用PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix,with UNG(Code No. RR651)时通过UNG的作用,可以有效防止carryover contamination产生的假阳性
 
 
 
  推荐阅读:活体样品起始的探针法RT-qPCR