Takara

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使用例

使用例-1

将未加帽的RNA（5’-三磷酸RNA）制备成带有Cap-0/ Cap-1的RNA。（两步反应）

后续可以使用 mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase （Code No. 2470A）制备 Cap-1 RNA（可参照2470A说明书）

使用例-2

将未加帽的RNA（5’-三磷酸RNA）制备成带有Cap-1的RNA。（一步反应）

1 为了去除转录产物5’端的二级结构，在反应前对RNA（5’-三磷酸RNA）进行热变性，可以提高加帽效率。 (1) 取50 μg RNA，用RNase-free water将体积调至38 μl(制备Cap-0 RNA）或34 μl（制备Cap-1 RNA）。 (2) 在65℃下热变性5-10分钟，然后立即在冰上放置5分钟。 2 SAM不稳定。在反应前，使用RNase-free water将32 mM原液进行必要量的稀释，稀释液使用前冰上放置。 3 如果RNA的加帽效率低，则增加酶的用量和/或延长孵育时间。 4 可根据实验需要放大反应体系。 *5 使用针对Faustovirus Capping Enzyme (S17)优化的缓冲液，而不是mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase (Code No. 2470A/B)提供的缓冲液。