Multiplex PCR基本反应条件

 
Multiplex PCR Assay Kit Ver.2(Code No.RR062A/B)
 
【反应組成】
 
2×Multiplex PCR Buffer(Mg2+, dNTP plus) 25 μl
Primer mix *1 适量
Multiplex PCR Enzyme Mix 0.25 μl
DNA模板 适量
灭菌水 up to 50 μl
 
*1 通常各引物使用的终浓度为0.2 μM。不同的反应,有时改变使用量会对结果有一定改善。
   引物的Tm值设定在55℃以上
   (Tm值按照下面的公式进行计算)
   Tm值= 4 × (G、C数) + 2 × (A、T 数) + 35 - 2 × (总碱基数)
   注) 利用Nearest Neighbor 法计算Tm值时,引物的Tm值设置在60℃以上。
 
【PCR条件】
【引物数在10对以下、扩增片段为~2 kb 的反应条件】
                                  94℃ 60 sec.
                                    ↓
94℃ 30 sec.   25~40 cycles
57~60℃ 30~60 sec.  
72℃ 30~60 sec.  
                                    ↓
                                  72℃ 10 min.
 
【引物数超过10对时的反应条件】
                                  94℃ 60 sec.
                                    ↓
94℃ 30 sec.   15~30 cycles
60℃ 1~10 min. *1  
                                    ↓
                                  72℃ 10 min.
 
*2 延伸时间根据引物数和反应性能不同而不同。使用的引物数为200对时,以4 min为标准进行设定。