Takara

粗提样品扩增实验例3：人指甲经SimplePrep^™ reagent for DNA制备的提取液

MightyAmp DNA Polymerase（Code No. R071A/B）

方法

5 mg人指甲加入SimplePrep reagent for DNA（Code No. 9180）44 μl，参照标准操作手册37℃ 6分、95℃ 3分孵育后，加入80 μl灭菌水混合。取2.5 μl上清（提取液）作为模板（25 μl反应体系），分别以1 kb（GC 含量26%、50%和72%）、2 kb（GC 含量27%、50%和69%）、4 kb（GC含量 33%、44%和63%）为目的区域，使用本酶和A公司及B公司抗阻害物酶，分别按照推荐的条件进行PCR扩增。取各反应液3 μl进行电泳，比较反应性能。

结果

A公司和B公司抗阻害物酶对于不同链长及GC含量的目的基因会出现无法扩增或扩增不良的结果，但是使用MightyAmp DNA Polymerase都得到了目的大小的扩增结果。DNA提取很难的人指甲只需要通过简单的操作即可制备提取液用作模板。通过使用MightyAmp，对特异性扩增困难的GC Rich及AT Rich的目的基因也可以有效扩增。