粗提样品的扩增例1:小鼠各组织的热碱法提取液

MightyAmp DNA Polymerase(Code No. R071A/B)
 
方法
在5~10 mg小鼠尾、肝脏、脾脏、胸腺、脑中添加180 μl的50 mM NaOH,95℃孵育10分钟后加入20 μl 的1 M Tris-HCl(pH8.0)进行中和,获得热碱法提取液。分别以2.5 μl热碱法提取液为模板(25 μl反应体系),使用MightyAmp DNA Polymerase、A公司抗阻害物PCR酶、B公司抗阻害物PCR酶及TaKaRa Taq Hot Start Version(TaKaRa Taq HS)(Code No. R007A),在各自推荐的PCR反应条件下对小鼠Tfrc 基因(2 kb)进行了PCR扩增。取3 μl反应液进行电泳,对反应性能进行了比较。
 
结果
使用TaKaRa Taq HS很少有PCR扩增产物,而使用MightyAmp DNA Polymerase可获得良好的扩增产物,与其他公司抗阻害物PCR酶相比,显示扩增效率更高。
 
 
Lane 1.   小鼠尾 MightyAmp的PCR反应条件:98℃ 2 min.
2.   小鼠肝脏
3.   小鼠脾脏                            98℃ 10 sec   35 cycles
4.   小鼠胸腺                            68℃ 2 min  
5.   小鼠脑
M.   pHY Marker