Small RNA Cloning Kit中的Control RNA是5′端磷酸化的21 mer RNA。使用此RNA进行实验时请确认PCR产物是否正确（下图：Lane 1，2的结果）。如果出现像Lane 3，4那样二条带的情况，通常是RNA的BAP处理不够充分，这时需要对RNA重新进行BAP处理。如果Control RNA实验没有问题，而在实际实验时出现自连情况，需增加使用Small RNA的量。
使用Control RNA时PCR产物电泳图
Lane 1、2：Control RNA经过BAP处理后结果
Lane 3、4：Control RNA未经过BAP处理的结果
（由于RNA的5′端带有磷酸基团，RNA产生了自连）
M：20 bp DNA Ladder
为了提高反应效率，Small RNA Cloning Kit中的T4 RNA Ligation Buffer中加入了PEG。PEG较粘稠，在Buffer吸取时要慢慢吸入，保证液体充分吸入Tip中（Tip吸入液体时，避免Tip尖端吸入气泡）。加入Buffer时尽量不要起泡，并用枪吹吸10次左右保证Buffer充分混匀。 注意：根据末端碱基不同，T4 RNA Ligase的Ligation反应效率会有所差别。
需要注意的事项有以下几点：
1. 实验操作时，Magnet Beads中的溶液去除后，应立即加入下一步溶液，以防止Beads干燥影响实验结果。
2. 电泳时DNA加样量过多或电泳时间过短，会出现DNA条带的拖尾现象。这时可以减少DNA的加样量或使用大孔胶进行电泳。此外，调小电压减低电泳速度也可改善拖尾现象。
3. 切胶时注意不要切到目的片段下面的小片段（Adaptor之间的连接片段）。片段上下有拖尾现象时，不要切取拖尾部分的DNA。
页面更新：2020-05-12 13:12:34
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