可以参考以下建议进行改善:
1.由于植物组织的不同,基因组DNA回收量会有所不同,请增加初始组织量。
2.松、山茶等固体叶片可以使用液氮研磨后再提取基因组DNA。
3.使用Microtube用研磨棒代替Pipet Tip进行按压处理可能会提高收量。
4.添加异丙醇或者70%乙醇后的离心时间延长(添加异丙醇后的离心时间10分钟→30分钟、添加70%乙醇后的离心时间3分钟→30分钟等),可能会提高收量。
5.根据植物组织的保存时间、保存条件的不同,基因组DNA收量会有所不同,请尽量使用新鲜样品。
可以参考以下建议进行改善:
1.有时回收的基因组DNA溶液中含有PCR反应的阻害物质,请将基因组DNA溶液进行稀释后再作为PCR反应的模板使用。
2.初始组织量太多,请减少初始组织量。
3.基因组DNA溶液呈茶褐色时,可能混入了明胶类物质,使用High-Salt Solution for Precipitation(Plant)(Code No. 9193)处理可能将缓和对PCR反应的阻害。使用High-Salt Solution for Precipitation(Plant)处理基因组DNA样品时,操作方法与处理RNA样品相同。但是不含PCR反应阻害物质的样品如果使用High-Salt Solution for Precipitation(Plant)处理后,相反有可能会引起对PCR反应的阻害,请注意!
4.PCR反应用酶选择TaKaRa Ex Taq® Hot Start Version(Code No. RR006)。
使用本产品时,有可能存在RNA污染,此时推荐使用RNase处理。
RNase处理方法:
1、向DNA溶液中加入终浓度为10-20 μg/ml的RNase A*
2、37℃保温30分钟
3、如有必要,可用酚/氯仿抽提。
*:RNase A粉末需用10 mM Tris-HCl pH7.5和15 mM NaCl配置成1 mg/ml的溶液。若含有DNase,100℃加热15分钟使DNase失活(无DNase的RNase A溶液可购买)。
页面更新:2020-04-29 15:17:35