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当前位置:首页 > 技术资料 > 相关问答 > Takara > 核酸提取纯化及DNA标记 > TaKaRa MiniBEST DNA Fragment Purification Kit Ver.4.0
Q-1:纯化DNA时,一般使用多少洗脱液洗脱?
A-1:

可以根据所需浓度计算使用洗脱液的体积,一般情况下,洗脱液体积大于30 μl即可洗脱Column中90%以上的DNA,所以洗脱液体积最好大于30 μl,当对DNA浓度要求较高时,也可以减少洗脱液体积至20 μl,但回收率会略有下降,应注意使用预热的洗脱液洗脱,并在洗脱离心之前静置1分钟以上,以增加洗脱效率。

Q-2:本试剂盒一次可以回收的DNA量的范围是多少?
A-2:

本试剂盒中Column一次回收的最大吸附量可达20 μg以上,最小DNA起始量也可低至500 ng所以使用前请对DNA样品的总量进行估算。

Q-3:DNA的收量较低,为什么?
A-3:

一般情况下,DNA的回收率可以达到70-95%。DNA收量较低时,可以从以下几个方面考虑:
① 使用前确认Buffer WB中是否加入了指定体积的乙醇。
② 洗脱前的空离步骤不可省略,此步骤可以除去Column上残留的洗液中的乙醇,否则影响洗脱效率。
③ 洗脱时将灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃后使用有利于提高洗脱效率。

Q-4:纯化得到的DNA反应性能不佳(酶切、连接),为什么?
A-4:

① 洗脱液中残留部分盐离子,加入Buffer WB后室温静置5分钟,有助于彻底清洗掉Column上残留的盐离子。
② 洗脱液中残留乙醇,在向Column中加入洗脱液之前,将Column在室温下静置2分钟有助于使Column上残留的乙醇彻底挥发,然后再加入洗脱液洗脱。
③ 进行DNA洗脱时用灭菌蒸馏水洗脱。

页面更新:2020-04-28 14:54:48